基因克隆技術（GeneCloningTechniques）2
二、目的基因和載體的連接獲得目的基因后必須將其放在一定的載體內才能在宿主細胞內擴增或表達。目的基因與載體的連接及其后續的轉化過程習慣上稱為克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技術獲得，因此這里先介紹PCR產物的克隆策略，然后再介紹其他的克隆方式。（一）PCR產物的克隆策略獲得PCR產物通常只是克隆的第一步。無論研究的起始材料是RNA還是DNA，最重要的是要有一種有效的方法對PCR產物進行克隆。目前已建立了多種對PCR產物進行克隆的方法，具體選擇哪種方法取決于以下幾個因素：PCR產物序列是否已知；載體上有哪些單一的限制性酶切位點可以利用；克隆PCR產物的用途等。1. 限制性內切酶酶切位點添加法 對PCR產物進行克隆的一個基本方法是利用目的片段所特有的限制性內切酶識別位點對產物進行酶切消化。一般是在設計PCR引物時就要考慮到連接方式，直接在引物末端包含與載體相匹配的限制性內切酶位點。設計PCR引物時必須考慮以下......閱讀全文
基因克隆技術（Gene－Cloning－Techniques）2
二、目的基因和載體的連接獲得目的基因后必須將其放在一定的載體內才能在宿主細胞內擴增或表達。目的基因與載體的連接及其后續的轉化過程習慣上稱為克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技術獲得，因此這里先介紹PCR產物的克隆策略，然后再介紹其他的克隆方式。（一）PCR產物的克隆策略獲得PCR
基因克隆技術（Gene－Cloning－Techniques）2
二、目的基因和載體的連接 獲得目的基因后必須將其放在一定的載體內才能在宿主細胞內擴增或表達。目的基因與載體的連接及其后續的轉化過程習慣上稱為克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技術獲得，因此這里先介紹PCR產物的克隆策略，然后再介紹其他的克隆方式。 （一
基因克隆的四大要素(Four－Elements－for－Gene－Cloning)
一、受體細胞 ：受體細胞的選擇是否合適將關系到能否表達，特別是高效表達。首先要注意不同的表達載體與受體細胞的關系，即原核表達載體適合原核細胞，真核載體則適合真核細胞，而農桿菌僅適用于植物細胞。即使大腸桿菌質粒，也應注意選擇合適的菌種。例如，當用含有T7 噬菌體啟動子的載體表達外源基因時，由于T7
克隆基因的表達（expression－of－cloned－gene）2
在雙鏈 DNA 分子中，只有一條鏈轉錄成 mRNA，這條鏈稱為有意義鏈(sense strand)，該基因的另一條鏈則稱反意義鏈(antisense strand)。在含有許多基因的 DNA 雙鏈中，每個基因的有意義鏈并不是在同一條 DNA 鏈上。也就是說，一條鏈上既具有某些基因的有意義鏈，
基因表達輪廓（gene－expressed－profile）技術2
經過這輪ＲＤＡ過程,Tester中的目的DNA將得到第一次富集。將第一輪產物更換新接頭,進行第二輪RDA過程,目的DNA可得到進一步的富集。該技術假陽性很低。但仍不能解決個體mRNA在豐度上存在巨大差異的問題,當靶序列濃度較低時,其富集受抑制。3：抑制消減雜交（suppression subtrac
基因cloning經驗指南
我們克隆基因的時候，往往可以通過一些途徑（如pcr,EST庫或者文庫篩選）得到基因的部分片段。然后通過3'race 和 5'race 方法往兩端延伸。有時會出現無法延伸的狀況，如果你超作沒有失誤的話，這時候很有可能是你模板GC含量過高的緣故，普通pcr 是沒有辦法延伸的，可以用擴高g
“電子”基因克隆－（sillcon－cloning）
利用計算機來協助克隆 基因，稱為“電子”基因克隆 （sillcon cloning），是與定位克隆 、定位候選克隆 策略并列的方法之一，即采用生物信息學的方法延伸EST序列，以獲得基因部分乃至全長的cDNA序列。EST數據庫的迅速擴張，已經并將繼續導致識別與克隆 新基因策略發生革命性變化。1
Bleeding－and－intravenous－techniques－in－pigs2
Bleeding techniques for smaller pigsThis picture depicts the venous drainage in the neck of piglets.A: the cephalic vein. This drains into:B: the exte
基因克隆(gene－clone)的幾種常用方法介紹2
其基本原理是：用一個在種源上相近的基因組將靶基因組中所有共同的基因掩蓋起來,而只暴露出特異的基因,在整個反應中只有特異基因能被擴增。其操作程序為:(1)用同一限制性內切酶(一般用Bam HI,Bgl II或Hind III)同時處理靶基因組和掩蓋基因組DNA，其中掩蓋基因組DNA的量至少要2
電泳技術(electrophoretic－techniques)簡介2
⒈材料與試劑 醋酸纖維素膜一般使用市售商品，常用的電泳緩沖液為pH8.6的巴比妥緩沖液，濃度在0.05-0.09mol/L。⒉操作要點⑴膜的預處理：必須于電泳前將膜片浸泡于緩沖液，浸透后，取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液，不可吸得過干。⑵加樣：樣品用量依樣品濃度、本身性質、染色方法及檢測方法等因素決
基因轉型(gene－transformation)
目的帶有特定基因的質體在分子生物研究上，是一個很重要的工具，將質體送入細菌的過程稱為基因轉形，經由基因轉型可使質體在細菌中大量復制，以備進一步研究。本實驗將把你在前面轉殖實驗中cDNA和質體DNA的連結反應送入細菌。 你將從本實驗學習如何進行基因轉型作用。原理早在1970年左右，有人發現細菌經由冰冷
基因克隆技術
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
基因克隆技術
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
Targeted－Gene－Replacement－in－Fungal－Pathogens－via－Agrobacterium－...
Genome sequence data on fungal pathogens provide the opportunity to carry out a reverse genetics approach to uncover gene function. Efficient meth
基因克隆技術1
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
基因克隆技術概述
基因克隆技術是分子生物學的核心技術，其目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝，用于深入分析基因的結構與功能，并可達到人為改造細胞以及物種遺傳性狀的目的。基因克隆的一項關鍵技術是DNA重組技術，它利用酶學方法將不同來源的DNA分子進行體外特異性切割，重新拼接組裝成一個新的雜合DNA分子。在此基礎上將
Fusion－and－Cloning
ReagentsMedium A - Pre-fusion Medium and Hybridoma Expansion MediumMedium B - Fusion Medium Medium C - Hybridoma Recovery MediumMedium D - Hybridoma S
Fusion－and－Cloning
Author:?Nanci DonackiSource:?Contributed by Nanci DonackiAbstract:?Procedure for establishing hybridoma in one stepReagents(StemCell Technologies, Inc
蛋白質分析技術(Analytical－Techniques－for－Protein)2
二、透析和超濾1.透析（Dialysis）：就是利用蛋白質分子不能通過半透膜（Semipermeable membrane）而小分子可以自由透過的性質，使蛋白質與小分子物質分開。作用：脫鹽、無機離子和小分子物質等。透析膜：動物膜、羊皮紙、火棉膠、賽璐玢或其他材料等。2.超濾（ultrafiltrat
Aseptic－Techniques
Aseptic techniques ensure that all cell culture procedures are performed to a standard that will prevent contamination from bacteria, fungi, mycoplasm
Cloning－of－small－RNAs－with－5’－phosphate－and－3’－OH－ends2
3’ Adaptor Ligation and PurificationHeat shock the RNA by putting at 90°C for 30 seconds. Snap cool on ice.Set up the 3’Adaptor ligation reaction in a
SingleChain－Fv－Antibodies－Expressed－in－Plants
Methods of gene cloning and genetic engineering of immunoglobulins and transgenic plant techniques have given rise to new approaches in plant biot
General－Cloning－Protocols
Large Scale Preps:?(See Large scale plsasmid prep protocol for more details)Cultures: Inoculate a 5 mL LB/Amp (50 - 100 μg/mL) culture in early a.m. w
基因芯片(gene－chip)的原理
基因芯片(gene chip)的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是雜交測序方法,即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法,在一塊基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG,與基因芯片上對應位置的核酸探針產生互補匹配時,通
報告基因(report－gene)的應用
報告基因被廣泛地應用于細胞生物學中的基因表達和細胞相關內容的研究。常用的報告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、綠色熒光蛋白基因及螢火蟲熒光素酶基因等。在這些報告基因中螢火蟲熒光素酶基因因其表達產物－熒光素酶敏感性高，測定方法快速且宜于掌握，線性好，并且熒光素酶產生的
基因印記與動物克隆技術
基因印記 (imprinting) 對核移植后基因組重新編程的影響。基因印記現象在哺乳動物的發育過程中普遍存在,它是指基因的表達與否取決于它們是在父源染色體上還是母源染色體上。有些印記基因只從母源染色體上表達,而有些則只從父源染色體上表達。基因印記與動物克隆技術的成功及不足有何關系值得深入研究。
原核表達——基因克隆技術
原核表達可以用于檢測（1）發生在原核生物內的基因表達。（2）通過基因克隆技術，將外源目的基因，通過構建表達載體并導入表達菌株的方法，使其在特定原核生物或細胞內表達。實驗方法原理一個完整的表達系統通常包括配套的表達載體和表達菌株。如果是特殊的誘導表達還包括誘導劑，如果是融合表達還包括純化系統或者Tag
GeneCopoeia基因克隆技術相關研究
與PCR、qPCR等技術一樣，作為分子實驗室必備手段，分子克隆技術被廣泛用于多樣的基因功能研究。所謂分子克隆指的是在體外將核酸分子插入病毒、質粒或其他載體分子，構成遺傳物質的新組合，使之進入宿主細胞內并獲得持續穩定增殖能力和表達。?基因克隆技術的發展經歷3個階段，第一階段為經典的T4 DNA連接酶介
Oxidative－Stress－Induced－Gene－Expression－Via－Nrf2
Reactive oxygen species (ROS) can damage biological macromolecules and are detrimental to cellular health. Electrophilic compounds, xenobiotics and an
差異基因表達研究方法介紹（DDPCR；GENEFISHING；GENE－CHIP）
差異基因表達的研究受到了廣泛的關注，常用的技術有DD-PCR；GENE-FISHING；GENE CHIP等。簡單介紹如下： DDRT -PCR技術即mRNA差異顯示聚合酶鏈式反應技術，此技術是以PCR技術和聚丙烯凝膠電泳技術為基礎，結合銀染或放射性自顯影等顯色技術，能快速有效地