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  • RNAi的實驗原理和操作實用技術(3)

    3.DEAE-葡聚糖和polybrene帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體復合物和帶負電的DNA分子使得DNA可以結合在細胞表面。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克將DNA復合體導入。兩種試劑都已成功用于轉染。DEAE-葡聚糖僅限于瞬時轉染。4.機械法轉染技術也包括使用機械的方法,比如顯微注射和基因槍(biolistic particle)。顯微注射使用一根細針頭將DNA,RNA或蛋白直接轉入細胞質或細胞核。基因槍使用高壓microprojectile將大分子導入細胞。5.陽離子脂質體試劑在優化條件下將陽離子脂質體試劑加入水中時,其可以形成微小的(平均大小約100-400nm)單層脂質體。這些脂質體帶正電,可以靠靜電作用結合到DNA的磷酸骨架上以及帶負電的細胞膜表面。因此使用陽離子脂質體轉染的原理與以前利用中性脂質體轉染的原理不同。使用陽離子脂質體試劑,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電的DNA自動結合......閱讀全文

    RNAi的實驗原理和操作實用技術(3)

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    RNAi的實驗原理和操作實用技術

    ? 幾十年來生物學上最重要的進展,也許是關于RNA分子能調節基因表達的發現。RNA干涉(RNAi)是指雙鏈RNA分子使基因表達沉寂的現象,是在線蟲中發現的,在 1998年的一篇Nature論文中被公諸于眾。??? 此后,科學家們明白,RNAi還有其他形式,它既是一種了解基因功能的強大工具,又是很多生

    RNAi的實驗原理和操作實用技術(2)

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    RNAi實驗原理與方法

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    RNAi實驗原理與方法

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    RNAi實驗原理與方法(二)

    3.用RNase III 消化長片斷雙鏈RNA制備siRNA其他制備siRNA的方法的缺陷是需要設計和檢驗多個siRNA序列以便找到一個有效的siRNA。而用這種方法——制備一份混合有各種siRNAs “混合雞尾酒” 就可以避免這個缺陷。選擇通常是200—1000堿基的靶mRNA模版,用體外轉錄

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    3.用RNase III 消化長片斷雙鏈RNA制備siRNA其他制備siRNA的方法的缺陷是需要設計和檢驗多個siRNA序列以便找到一個有效的siRNA。而用這種方法——制備一份混合有各種siRNAs “混合雞尾酒” 就可以避免這個缺陷。選擇通常是200—1000堿基的靶mRNA模版,用體外轉錄

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    RNAi-實驗介紹

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