電穿孔技術在轉基因及動物克隆中的應用
郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四軍醫大學全軍骨腫瘤研究所 西安 710038 Institute of Orthopedic Oncology, Fourth Military Medical University, Xi''an 710038, China 摘 要 電穿孔技術利用電場造成細胞膜的改變從而將DNA導入細胞內，同時還可用于細胞融合以及動物克隆等。基因電轉移的效率通常比化學法提高1-2個數量級，主要與脈沖波形、長度、緩沖液等有關。方波直流電脈沖應用廣泛，在有關細胞核移植的多項研究報告中均指出其重要作用。關鍵詞 基因轉移，胚胎克隆，電穿孔 過去十年中，關于基因功能的研究取得了豐碩的成果，并因此帶動了基因工程、基因治療以及單克隆抗體技術的進步，而在動物生殖生物學領域的革命性技術進步則導致了綿羊、牛、猴子和小鼠等多種動物的克隆成功。電穿孔技術和儀器的發展在這些......閱讀全文
電穿孔技術在轉基因及動物克隆中的應用
Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu第四軍醫大學全軍骨腫瘤研究所 西安 710038Institute of Orthopedi
電穿孔技術在轉基因及動物克隆中的應用
郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四軍醫大學全軍骨腫瘤研究所 西安 710038 Institute of Orthopedic Oncology, Fourth Military Medical University, Xi''an 710038
電穿孔技術在轉基因及動物克隆中的應用
Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning 郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四軍醫大學全軍骨腫瘤研究所 西安 710038 Insti
電穿孔技術在轉基因及動物克隆中的應用
Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning 郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四軍醫大學全軍骨腫瘤研究所 西安 710038 Institute of Orthop
電穿孔技術的應用
當細胞置于非常高的電場中，細胞膜就變得具有通透性，能讓外界的分子擴散進細胞內，這一現象稱為電穿孔。運用這一技術，許多物質，包括DNA、RNA、蛋白質、藥物、抗體和熒光探針都能載入細胞。作為一種基因轉導方法，電穿孔已被廣泛用于各種細胞類型，包括細菌、酵母、植物和動物細胞；而且，它還能作為注射方法（稱為
電穿孔技術醫療應用
不可逆的電穿孔在Gustave Roussy研究所，由Lluis M Mir領導的第一批研究醫療應用的電穿孔。在這種情況下，他們研究了使用可逆電穿孔與不可滲透的大分子。東弗吉尼亞醫學院和奧多明尼昂大學的研究人員首先研究了如何在人類細胞上使用納秒脈沖，并于2003年出版。關于不可逆的電穿孔，2007年
顯微注射法在轉基因動物上的應用
以顯微注射法轉外源基因沒有長度上的限制，已證明數百kb之DNA片段均可以成功產制出轉基因動物。其缺點是設備精密而昂貴、操作技術需要長時間的練習，以及每次只能注射有限的細胞。這些操作中所使用的微量移液管是用毛細管拉針器(pipettepuller)來制作的，先將玻璃毛細管加熱到其熔化的溫度，再將其
轉基因技術在工業領域的應用
工業領域的應用主要指在食品工業中的應用,主要包括:(1)對工業發酵食品菌種如酵母菌和乳酸菌的改良;(2)生產食品添加劑和加工助劑;(3)制造有益于人類健康的保健成分或有效因子,攜帶不同目的基因的轉基因動植物可以成為人類治療各種疑難雜癥的資源豐富的藥庫。例如,目前廣泛使用的啤酒酵母、食品酶制劑、奶酪等
轉基因技術在醫學領域的應用
醫學中轉基因技術的應用范圍很廣。動物轉基因技術可以創造診斷和治療人類疾病的動物模型,可克服單純依靠自然突變體的局限。轉基因技術還應用于蛋白質多肽藥物的生產,如生產胰島素、干擾素、免疫球蛋白、促紅細胞生成素、尿激酶、人血紅蛋白、人表皮生長因子、粒細胞等等珍稀藥物;還可利用動植物生產疫苗,主要包括乙肝表
電穿孔技術的醫學應用特點
不可逆的電穿孔在Gustave Roussy研究所，由Lluis M Mir領導的第一批研究醫療應用的電穿孔。在這種情況下，他們研究了使用可逆電穿孔與不可滲透的大分子。東弗吉尼亞醫學院和奧多明尼昂大學的研究人員首先研究了如何在人類細胞上使用納秒脈沖，并于2003年出版。關于不可逆的電穿孔，2007年
轉基因動物技術
從20世紀70年代中期開始，就有人嘗試用各種辦法向動物體內轉移外源基因。如將牛奶成分中特有的基因轉移到白鼠體內，這些外來基因在白鼠體內重組后，白鼠分泌的乳汁便含有牛奶成分。這種通過人工方法獲得外來基因的白鼠，稱為轉基因鼠。 轉基因動物技術的核心，是把遺傳的功能單位──基因轉移到動物體內，
轉基因技術的發展及其在轉基因動植物的應用
自從人類學會蓄養動物、耕作植物以來，我們的祖先就從未停止過對物種的遺傳改良。過去的幾千年里改良物種的主要方式：針對自然環境造成的突變或無意的人為因素所產生的優良基因和重組個體進行選育和利用，從而通過隨機和自然的積累優化基因。然而這種極低幾率且無人類控制性的被動模式大大阻礙了農業的發展，迫切地需要
轉基因技術的發展及其在轉基因動植物的應用
自從人類學會蓄養動物、耕作植物以來，我們的祖先就從未停止過對物種的遺傳改良。過去的幾千年里改良物種的主要方式：針對自然環境造成的突變或無意的人為因素所產生的優良基因和重組個體進行選育和利用，從而通過隨機和自然的積累優化基因。然而這種極低幾率且無人類控制性的被動模式大大阻礙了農業的發展，迫切地需要
轉基因技術在農牧業的應用
轉基因生物技術可以加快農作物的生長速度、增強抗病性、增加產量、增強對環境的適應能力、增強抵抗除草劑和殺蟲劑的能力。全世界進入田間試驗的轉基因植物已超過500種,但國內轉基因食品的范圍還比較小。①將抗除草劑基因轉入到栽種的作物里面,能有效地防治田間雜草,保護作物免除藥害。從植物和微生物中已克隆出多種不
動物轉基因技術的過程介紹
動物轉基因就是基因組中含有外源基因的動物。它是按照預先的設計，通過細胞融合、細胞重組、遺傳物質轉移、染色體工程和基因工程技術將外源基因導入精子、卵細胞或受精卵，再以生殖工程技術，有可能育成轉基因動物。 通過生長素基因、多產基因、促卵素基因、高泌乳量基因、瘦肉型基因、角蛋白基因、抗寄生蟲基因、抗
轉基因動物技術概述
從20世紀70年代中期開始，就有人嘗試用各種辦法向動物體內轉移外源基因。如將牛奶成分中特有的基因轉移到白鼠體內，這些外來基因在白鼠體內重組后，白鼠分泌的乳汁便含有牛奶成分。這種通過人工方法獲得外來基因的白鼠，稱為轉基因鼠。 轉基因動物技術的核心，是把遺傳的功能單位──基因轉移到動物體內，使它成為動物
轉基因動物技術(一)
轉基因動物自1980--1981年產生后，迅速發展。它克服了物種之間的生殖隔離，實現了動物物種之間遺傳物質的交換和重組，這不僅為遺傳物質的研究提供了新的手段，豐富了物種的基因庫，也擴大了生命科學的視野，由于轉基因動物技術具有分子及細胞水平操作、整體表達的特點，使得人們能從更完整的系統中去認識生物分子
轉基因技術的發展及其在轉基因動植物的應用（二）
體細胞核移植是近些年來新出現的一種轉基因技術。該方法是先把外源基因與供體細胞在培養基中培養，使外源基因整合到供體細胞上，然后將供體細胞細胞核移植到受體細胞——去核卵母細胞，構成重建胚，再把其移植到假孕母體，待其妊娠、分娩，便可得到轉基因的克隆動物。在這一技術中，外源基因的穩定表達和重建胚的良好發育是
轉基因技術的發展及其在轉基因動植物的應用（一）
轉基因技術的發展自從人類學會蓄養動物、耕作植物以來，我們的祖先就從未停止過對物種的遺傳改良。過去的幾千年里改良物種的主要方式：針對自然環境造成的突變或無意的人為因素所產生的優良基因和重組個體進行選育和利用，從而通過隨機和自然的積累優化基因。然而這種極低幾率且無人類控制性的被動模式大大阻礙了農業的發展
轉基因動物的腫瘤學應用
腫瘤基因的發現是近10年來腫瘤學研究的重大突破，現已發現乳腺癌基因等100多個腫瘤基因。實驗證明，各種脊椎動物都攜帶腫瘤基因，在通常情況下并不引起細胞癌變，只有在某些條件下才能被激活使癌細胞增生而導致癌變。建立帶有腫瘤基因的轉基因動物可了解哪些組織對腫瘤基因轉化活性敏感、腫瘤形成與其基因的關系、腫瘤
轉基因動物的改良培育應用
經典的遺傳育種方法要在同種或親源關系很近的種間才能進行，并且受到變異或突變的限制，而使用重組DNA技術在短時間內就可使親緣關系很遠的種間遺傳信息進行交換和重組。另外由于轉基因動物可以穩定地整合外源基因，并在合適的組織表達，還能將這種性狀遺傳給后代，這樣就可以生產出生長快、產肉、產毛、產奶更多而耗料極
轉基因動物的研制生產應用
將在醫學領域中有價值的生物活性蛋白基因導人家畜或家禽的受精卵，在發育成的轉基因動物體液或血液、乳、尿、腹水中收獲基因產物，便可獲得大量有價值的生物活性蛋白，通常將此動物稱為“動物生物反應器”。其中以乳汁為最理想的分泌部位。tPA（組織型纖溶蛋白元激活因子）已在轉基因小鼠的乳汁中得到了表達，成為治療血
轉基因動物的臨床應用特點
轉基因動物（transgenicanimal）在目前生物及醫學研究方面的應用極為廣泛，轉基因小鼠一直是研究外源基因構筑型態、染色體嵌插、轉基因表現及調節的最佳模式，也是建立轉基因技術最好的工具，尤其是在轉基因家畜之前，先以小鼠進行預備試驗是求事半功倍不可或缺的過程。 轉基因動物應用的領域可以包括研
轉基因動物的免疫學應用
巴賓耐特（Babinet）發現雖然轉基因小鼠產生HBsAg，但在6個月內沒有任何病理變化，表現為一種持續的帶病毒狀態。這些結果表明：乙型肝炎患者的肝細胞損傷不是由HBV的HBsAg表達直接引起，而是通過對肝細胞膜上的病毒抗原發生免疫反應造成的。因此，可以用轉基因小鼠模型來研究免疫耐受與肝細胞損傷的關
轉基因動物的遺傳病應用
通常是將功能正常的外源基因導入動物體的靶細胞內，用來彌補缺陷的基因，改變患病細胞的遺傳物質，進行基因治療。相反的將顯性疾病基因或一個、甚至多個外源基因人為地導入動物體內，就可制備遺傳性疾病的轉基因動物模型，研究和治療人類遺傳性疾病。例如亨廷頓（Hungtington）將舞蹈病基因導入小鼠，建立了舞蹈
轉基因動物的遺傳學應用
利用自然突變或人為修飾的基因作為外源基因，構建轉基因動物，研究導人的異常基因的表型效應，可以了解基因結構和功能的關系，還可用于基因組印跡分析、遺傳缺陷的矯正等。
轉基因技術的具體技術應用
轉基因技術已廣泛應用于醫藥、工業、農業、環保等領域。醫學醫學中轉基因技術的應用范圍很廣。動物轉基因技術可以創造診斷和治療人類疾病的動物模型，可克服單純依靠自然突變體的局限。轉基因技術還應用于蛋白質多肽藥物的生產，如生產胰島素、干擾素、免疫球蛋白、促紅細胞生成素、尿激酶、人血紅蛋白、人表皮生長因子、粒
電穿孔技術應用與藥物和基因傳遞
電穿孔還可以用于通過施加瞬時透化細胞膜的短且強烈的電脈沖來幫助將藥物或基因遞送到細胞中，從而允許運輸分子，否則不能通過細胞膜運輸。當待輸送的分子是DNA時，這個過程被稱為電化學療法，當待輸送的分子是化學治療劑或基因電轉移時。來自卡羅林斯卡研究所和牛津大學的科學家使用外來體的電穿孔在全身注射（在血液中
顯微注射法應用轉基因動物
以顯微注射法轉外源基因沒有長度上的限制，已證明數百kb之DNA片段均可以成功產制出轉基因動物。其缺點是設備精密而昂貴、操作技術需要長時間的練習，以及每次只能注射有限的細胞。這些操作中所使用的微量移液管是用毛細管拉針器(pipettepuller)來制作的，先將玻璃毛細管加熱到其熔化的溫度，再將其拉制
轉基因技術的發展與轉基因動植物
1.轉基因技術的發展 自從人類學會蓄養動物、耕作植物以來，我們的祖先就從未停止過對物種的遺傳改良。過去的幾千年里改良物種的主要方式：針對自然環境造成的突變或無意的人為因素所產生的優良基因和重組個體進行選育和利用，從而通過隨機和自然的積累優化基因。然而這種極低幾率且無人類控制性的被動模式大大