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    Western印跡法(試劑配制和操作步驟)

    Western印跡法(試劑配制和操作步驟) 這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體,并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。 Western使用的探針是抗體,它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行鑒別和鑒定。 儀器:高壓鍋、電動勻漿機、高速離心機、垂直板電泳轉移裝置、脫色搖床。 試劑:單去污劑裂解液、分離膠、4%濃縮loading、G250考馬斯亮藍溶液、5XSDS上樣緩沖液、電泳緩沖液、轉移緩沖液、10X麗春紅染液、封閉液、TBST、TBS、顯影液、定影液、抗體、ECL化學發光試劑。 雜品與耗材:各種規格的吸頭、離心管和加樣器;各種規格的燒杯、量筒和平皿等玻璃器材;硝酸纖維素膜,乳膠手套,口罩,保鮮膜,X-光片夾,X-光片,計時器,吸水紙。 試劑配制: (一)母液 3......閱讀全文

    如何獲得精準的Western Blot實驗結果

      蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們,實

    如何獲得精準的Western Blot實驗結果

      蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們,實

    Westernblot實驗步驟及注意事項

    Westernblot 實驗步驟 1. 組織塊稱重 2. 利用液氮、研缽粉碎組織塊 3. 加入RIPA緩沖液(每克組織3 ml RIPA),PMSF(每克組織30μl,10 mg/ml PMSF),利用Polytron進一步勻漿(15,000轉/分*1分鐘)維持4℃4.

    如何獲得精準的Western Blot實驗結果

    蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們,實驗做

    Western Blot全自動分析儀與傳統WB方法的比較

      Western Blot全自動分析儀與傳統WB方法的比較,傳統Western blot方法是利用抗原抗體的免疫反應,先將蛋白通過SDS-PAGE電泳分離開來,然后再利用電場力的作用將膠上的蛋白轉移到固相載體(硝酸纖維素膜即NC膜)上,然后再加抗體形成抗原抗體復合物,利用發光或顯色原理將結果顯示到

    Western Blot全自動分析儀與傳統WB方法的比較

    Western Blot全自動分析儀與傳統WB方法的比較,傳統Western blot方法是利用抗原抗體的免疫反應,先將蛋白通過SDS-PAGE電泳分離開來,然后再利用電場力的作用將膠上的蛋白轉移到固相載體(硝酸纖維素膜即NC膜)上,然后再加抗體形成抗原抗體復合物,利用發光或顯色原理將結果顯示到膜或

    如何做出一手漂亮的Western Blot實驗結果?

    蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們

    如何獲得精準的Western Blot實驗結果

    蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們

    如何獲得精準的Western Blot實驗結果

    蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們

    免疫印跡法實驗原理和常見故障分析

     免疫印跡法(western blot) 原理:    通過電泳區分不同的組分,并轉移至固相支持物,通過特異性試劑(抗體)作為探針,對靶物質進行檢測,蛋白質的Western印跡技術結合了凝膠電泳的高分辨率和固相免疫測定的特異敏感等多種特點,可檢測到低至1~5n

    Western blot 標準操作規程(SOP)

    關鍵詞:western blot 聚丙烯酰胺 分離膠 積層膠 電泳目的:蛋白質的檢測與分析【原理】一個基因表達終極結果是產生相應的蛋白質(或酶)。因此檢測蛋白質是測定基因表達的主要標志,檢測蛋白質的方法很多,除ELISA法外,也可用與檢測DNA和RNA相類似的吸印方法。前兩法有“南”和“北”之意,故

    Western Blot 相關技術操作與原理-1

    【實驗原理】: Western Blot 印跡方法,又稱為免疫印記,是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,對不同分子量的蛋白質進行分離,并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物(NC膜或PVDF膜)上,用抗靶蛋白的非標記抗體(一抗)與轉印后膜上的靶蛋白進

    Western Blot 相關技術操作與原理-2

    一、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳     30%丙烯酰胺-雙丙烯酰胺溶液 4 × 濃縮膠緩沖液 (Stacking gel Buffer, pH 6.8) 4 × 分離膠緩沖液 (Resolving g

    蛋白質的Western blot印跡分析

    一、原理  一個基因表達的最終產物是產生相應的蛋白,因此檢測蛋白是測定基因表達的主要標志。    原理:Western Blotting 是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙稀酰胺凝膠電泳,對不同分子量的蛋白質進行分離;并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持

    Western Blot實驗技術詳解和常見問題解答

    Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被

    Western印跡法檢測蛋白

    實驗概要Western印跡法檢測蛋白的敏感性約為1-5ng,0.75mm厚的SDS-PAGE板的一個孔可上總蛋白量約為100μg,所以只要被檢蛋白不低于總蛋白量的萬分之一,即可被檢測出來。如果所分析的樣品為未知時,應同時作陽性對照。雜交技術主要有NC膜的封閉,靶蛋白與第一抗體的反應,結合靶蛋白的一抗

    Westernblot

    實驗概要免疫印跡是一個用于蛋白質分析的常規技術,在電場的作用下將電泳分離的蛋白從凝膠轉移至一種固相支持物,然后利用抗原—抗體的特異性反應,從蛋白混合物中檢測出目標蛋白,從而定量或定性地確定正常或實驗條件下細胞或組織中目標蛋白的表達情況。Western blot還可用于蛋白—蛋白、蛋白—DNA

    顯微注射法建立轉基因小鼠模型的操作流程

    實驗概要本實驗詳細介紹了顯微注射法建立轉基因小鼠模型的操作流程。實驗原理轉基因小鼠制備的基本原理是將改建后的目的基因(或基因組片段)用顯微注射法注入供體小鼠的受精卵(或著床前胚胎細胞),然后將此受精卵(或著床前胚胎細胞)再植入受體動物的輸卵管(或子宮)中,使其發育成攜帶有外源基因的轉基因動物,通過分

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