RNAi表達載體構建
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠以序列同源互補的mRNA為靶目標,降解特定的mRNA.RNAi的發現具有劃時代的意義,它不僅深入揭示 了細胞內基因沉默的機制,而且它還是后基因組時代基因功能分析的有力工具,極大地促進了人類揭示生命奧秘的進程.現在越來越多的研究人員開始采用RNAi 來研究生物體的基因表達.RNAi技術可廣泛應用到包括功能基因組學,藥物靶點篩選,細胞信號傳導通路分析,疾病治療等等.目前為止較為常用的5種制備siRNAs的方法包括：·化學合成·體外轉錄·長片斷dsRNAs經RNase III 類降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase ......閱讀全文
RNAi表達載體構建
近年來的研究表明，一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達，誘使細胞表現出特定基因缺失的表型， 稱為RNA干擾（RNA interference，RNAi）。siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子，能夠
RNAi表達載體構建
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠
RNAi表達載體構建（二）
（2）、序列同源性分析:?將潛在的序列和相應的基因組數據庫（人,或者小鼠,大鼠等等）進行比較,排除那些和其他編碼序列/EST同源的序列.例如使用BLAST（ www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/）選出合適的目標序列進行合成.并非所有符合條件的siRNA都一樣有效,其原因還不清楚
RNAi表達載體構建（一）
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分
siRNA表達載體的構建
siRNA表達載體構建可應用于：（1）作為后基因組時代基因功能分析的有力工具；（2）基因組學、細胞信號傳導通路分析；（3）藥物靶點篩選、疾病治療。實驗方法原理多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RN
siRNA表達載體的構建
實驗方法原理 多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol
siRNA表達載體的構建
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U
植物表達載體的構建
實驗概要本實驗介紹了一種構建植物表達載體的方法。實驗步驟1. 植物正義表達載體的構建??? 1) 用SmaI和SacI雙酶切pTriplEx2-GhMT3a和植物表達載體pBI121：??? 2) 進行瓊脂糖凝膠電泳，回收GhMT3a片段和pBI121載體；??? 3) 連接：連接體系為：混勻后4-
真核基因表達載體的構建
提高目的基因在哺乳動物細胞中表達的策略：1、DNA水平：增加基因拷貝數(1)高拷貝載體；（2）基因共擴增；2、轉錄水平：利用強啟動子、增強子，可誘導啟動子，如CMV、Tet；3、翻譯水平：優化翻譯起始序列和非編碼區序列。本篇文章來源于網絡，如有異議請聯系我們，我們將在3個工作日內作出處理。
原核表達載體的構建介紹
1、獲得目的基因 （1）通過PCR方法：以含目的基因的克隆質粒為模板，按基因序列設計一對引物（在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點），PCR循環獲得所需基因片段。 （2）通過RT-PCR方法：提取總RNA，以mRNA為模板，逆轉錄形成cDNA第一鏈，以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物
基因編輯鼠－sgRNA表達載體構建
繼上次發表的Guide RNA設計和篩選的相關知識之后，希望大家還沒有忘記相關的操作和技巧，今天，我們就來和大家聊聊后續的實驗，在基因編輯鼠的過程中，sgRNA表達載體是如何構建的呢？在靶點篩選結束之后，下一步就要進行sgRNA載體構建。在構建表達載體前，應根據實驗目的選取合適的表達質粒。比如進行實
靶向－EGFR基因－siRNA表達載體的構建
實驗材料靶向EGFR基因siRNA試劑、試劑盒pSilencer2.1-U6載體EcoR IBamH IT4 DNA連接酶鼠抗人anti-EGFRFITC標記兔抗小鼠IgGCy3標記兔抗小鼠IgG甘油多聚甲醛二甲基亞砜儀器、耗材流式細胞儀熒光顯微鏡二氧化碳細胞培養箱酶標儀培養板蓋玻片載玻片利用Lip
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 裂解緩沖液 檢測抗原-抗體復合物所用試劑 SM TNT 緩沖液 洗滌緩沖液
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
檢測結合抗體的方法有以下 3 種：放射化學篩選，生色反應篩選及化學發光反應篩選。3 種方法的優缺點在本章導言中有所論述。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液 125I 標記的蛋白質 A 或 125I 標記的免疫球蛋白放射性碘化第二抗體第一抗體LB 或 SOB 瓊脂平板儀器、耗材 空氣培養箱平頭鑷子 裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器硝酸纖維
酵母表達載體的構建與酵母轉化
實驗概要本實驗介紹了酵母表達載體的構建、酵母轉化方法及酵母抗逆實驗。主要試劑試劑配制：1 .1 M Tris.Cl(pH 7.5)(100 ml)：12.1g Tris堿，加80 ml ddH2O，濃HCl調pH 7.5，定容至100 ml；2. 0.5 M EDTA(pH 8.0) (100 ml
LSCM熒光表達載體的選擇和構建
熒光表達載體的選擇和構建當對目的蛋白的功能或定位情況了解較少的情況下，可以嘗試把熒光蛋白位于目的蛋白的?N?末端或?C?末端。但當目的蛋白上已經存在定位信號或末端存在修飾，需要把熒光蛋白插入到目的蛋白理想的位置，這樣可以避免熒光蛋白的插入對蛋白功能或定位產生影響。由于綠色熒光蛋白存在缺陷，因此?GF
LSCM綠色熒光融合蛋白表達載體的構建
綠色熒光融合蛋白表達載體的構建?綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)?及其突變體能在各種不同的生物系統中表達，這對細胞生物學的研究具有重要意義。而熒光蛋白的折疊能力及其同細胞內蛋白的融合能力，使研究?者能直接在細胞體內觀察到蛋白質的特性。研究者不需要把蛋白質經過
真核表達載體pcDNA3.1GFP的構建
【原理】引物中設計入限制酶位點：由于PCR引物的5'末端可以增加一些非互補堿基，因此可以在兩引物的5'末端設計單限制酶或雙限制酶切位點。這樣得到的PCR產物用限制酶消化產生粘性末端，即可與有互補粘端的載體DNA重組。這種克隆方法效率較高，且當兩引物中設計不同酶切位點時，可有效地定向克
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 IPTG 抗原-抗體復合物檢測試劑 SM TNT 緩沖液 洗滌緩沖液 放射
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗
在典型的免疫篩選實驗中，λ噬菌體表達載體構建的文庫應鋪在不含異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大腸桿菌菌株的平板上。誘導物的缺少保證了噬菌斑順利形成前不產生對宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，將平板從 42°C 移到 37°C 以穩定溫度敏感型的所有融合蛋白。本實驗來源于分子克隆實驗指
Gateway克隆技術BP反應構建入門載體與LR反應構建表達載...
Gateway克隆技術-BP反應構建入門載體與LR反應構建表達載體的區別? ? ? ?提到克隆、重組載體，就想到5字金言：分、切、連、轉、篩，“分”是指分離制備合格的待操作的DNA；“切”是指用序列特異的限制性內切酶切開載體DNA，或者切出目的基因；“連”是指用DNA連接酶將目的DNA同載體DN
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗（一）
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿IPTG抗原-抗體復合物檢測試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液放射性碘標記第二抗體第一抗體LB 瓊脂板LB 頂層瓊脂板硝酸纖維素濾膜λ噬菌體表達文庫E.coli儀器、耗材 預設 42°C 的空氣培養箱培養管平頭鑷子裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器實驗步
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗（二）
方法λ噬菌體的平板培養1. 取適當大腸桿菌菌株的單克隆進行接種，按第 2 章方案 1 介紹的方法制備用于鋪平板的培養細菌。2. 假定每個 90 mm 平皿和 150 mm 平皿分別可長出 2X104 個和 5X104 個噬菌斑，計算篩選文庫所需平皿數。對應每個平皿準備一個無菌試管（13 mm
siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段45—50nt的發夾結構RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳動物細胞中的表達,shRNA在細胞內會自動被加工成為siRNA，從而引發基因沉默或者表達抑制。這一類啟動子包括大家熟悉的人
RNAi載體pSIRENDNR－Vector
Restriction Map and Cloning Site of the RNAi-Ready pSIREN-DNR Vector.?Unique restriction sites are in bold. RNAi-Ready pSIREN-DNR is provided as a lin
shRNA干擾載體構建
產品技術背景pRI系列載體是基于III類RNA聚合酶啟動子：人類H1啟動子的專用于哺乳動物細胞RNA干擾的載體。H1啟動子在哺乳動物細胞內合成類似siRNA分子的小分子RNA。由于H1啟動子有精確的轉錄起始位點和終止信號，H1啟動子轉錄產物精確生成人工設計的shRNA，shRNA經過RISC剪切后形
shRNA干擾載體構建
產品技術背景pRI系列載體是基于III類RNA聚合酶啟動子：人類H1啟動子的專用于哺乳動物細胞RNA干擾的載體。H1啟動子在哺乳動物細胞內合成類似siRNA分子的小分子RNA。由于H1啟動子有精確的轉錄起始位點和終止信號，H1啟動子轉錄產物精確生成人工設計的shRNA，shRNA經過RISC剪切后形
簡述siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞
Tec真核表達載體構建及其對細胞信號的影響實驗
實驗方法原理研究認為Tec有肝組織與造血組織分布特異性，主要與EPO、EGF、IL6、GM CSF等細胞因子介導的信號轉導途徑密切相關，參與調控造血細胞尤其是淋巴細胞的增殖與分化。實驗材料大鼠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?