雜交和放射自顯影
固定于濾膜上的RNA的預雜交、雜膠及淋洗等條件,與DNA雜交的相應條件基本相同。現簡述如下1)用下列兩種溶液之一進行預雜交,時間1-2小時。若于42℃進行,應采用。50%甲酰胺5xSSPE2xDenhardt試劑0.1%SDS若于68℃進行,應采用:6xSSC2xDenhardt試劑0.1%SDS 2)在預雜交液中加入變性的放射性標記探針,如欲檢測低豐度mRNA, 所用探針的量至少為0.1μg,其放射性比活度應大于2x108計數/(分.μg)在適宜的溫度條件下繼續溫育16-24小時。切記RNA只與雙鏈DNA中一條單鏈互補,因此如用單鏈探針, 則必須是能與RNA互補的一條單鏈。 3)用1xSSC、0.1%SDS于室溫洗漠20分鐘, 隨后用0.2xSSX、 0.1%SDS于68℃洗膜3次每次20分鐘。 4)用X光片(......閱讀全文
雜交和放射自顯影
固定于濾膜上的RNA的預雜交、雜膠及淋洗等條件,與DNA雜交的相應條件基本相同。現簡述如下1)用下列兩種溶液之一進行預雜交,時間1-2小時。若于42℃進行,應采用。50%甲酰胺5xSSPE2xDenhardt試劑0.1%SDS若于68℃進行,應采用:6xSSC2xDenhardt試劑0.1%SDS?
Northern印跡和總RNA雜交實驗——雜交和放射自顯影
實驗材料mRNA試劑、試劑盒甲酰胺SSPEDenhardt 試劑SDS儀器、耗材濾膜實驗步驟1. 濾膜進行 1~2 小時預雜交。在 42℃:50% 甲酰胺5x SSPE2 x Denhardt 試劑0.1% SDS或者在 68℃:6x SSC2x Denhardt 試劑0.1% SDS2. 把已變性
放射自顯影原位雜交玻片的復染和壓片固定實驗
實驗方法原理 實驗材料 水化并顯影的原位雜交玻片試劑、試劑盒 吉姆薩染色液(Fisher)710 mmol L磷酸鈉緩沖液pH 6.8 (500 mmol L原液按1:50稀釋)50%、70%、95% 和100% 乙醇、二甲苯封片介質為Permount (Fisher)或 Gelvatol
放射自顯影原位雜交玻片的復染和壓片固定實驗
姆薩 (Giemsa) 染色 蘇木精/伊紅染色 甲苯胺藍染色 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
原位雜交中的放射自顯影技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將同位素標記探針與固定于顯微鏡載玻片上的細胞進行雜交,然后通過放射自顯影將雜交位點顯影。 實驗材料 糖原 瓊脂糖
方案27.8-原位雜交中的放射自顯影技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將同位素標記探針與固定于顯微鏡載玻片上的細胞進行雜交,然后通過放射自顯影將雜交位點顯影。 實驗材料 糖原 瓊脂糖
方案27.8-原位雜交中的放射自顯影技術
實驗方法原理將同位素標記探針與固定于顯微鏡載玻片上的細胞進行雜交,然后通過放射自顯影將雜交位點顯影。實驗材料糖原瓊脂糖二硫蘇糖醇二硫蘇糖醇試劑、試劑盒焦碳酸二乙酯DEPC-水酚-氯仿-異戊醇乙酸鈉無水乙醇層析柱流動相緩沖液苯酚氯仿-界戊醇閃爍液組織洗滌液NaCl-DEPCEDTA蛋白酶K緩沖液蛋白酶
放射自顯影的原理和應用
放射自顯影即利用放射性可使照像乳膠和軟片感光的原理,對標本中放射性分子進行定位的技術。
放射自顯影原位雜交玻片的壓片固定_蘇木精/伊紅染色
實驗材料水化并顯影的原位雜交玻片試劑、試劑盒蘇木精染料(用乙酸處理的Harris改進蘇木精 無汞)0. 1%氫氧化銨伊紅染料儀器、耗材玻璃染色盤實驗步驟1) 將顯影過的載玻片(在玻片架中)放入盛有水的染色盤中。2) 在染色盤中準備以下各組液體:1個盤: 蘇木精染液2個盤: 水1個盤: 0.1%氫氧化
放射自顯影原位雜交玻片的壓片固定實驗_姆薩-染色
實驗材料水化并顯影的原位雜交玻片試劑、試劑盒吉姆薩染色液(Fisher)710 mmol L磷酸鈉緩沖液pH 6.8 (500 mmol L原液按1:50稀釋)50%、70%、95% 和100% 乙醇、二甲苯封片介質為Permount (Fisher)或 Gelvatol (現稱 Airvol來自A
放射自顯影原位雜交玻片的壓片固定實驗_甲苯胺藍染色
實驗材料水化并顯影的原位雜交玻片試劑、試劑盒甲苯胺藍染液儀器、耗材染色盤實驗步驟1) 用水稀釋甲苯胺藍染液。按所期望染色程度,憑經驗決定稀釋度,由1:100稀釋 起始。2) 玻片在稀釋好的染色液中短暫浸泡,然后在水中浸泡數次。按需求進行壓片固定。
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別:研究的對象不同。southern主要的對象是DNA,northern研究的對象是RNA,而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別:研究的對象不同。southern主要的對象是DNA,northern研究的對象是RNA,而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別:研究的對象不同。southern主要的對象是DNA,northern研究的對象是RNA,而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
顯微放射自顯影
實驗材料 小白鼠 試劑、試劑盒 酒精 二甲苯 Giemsa 染色液 乳膠 顯影液 定影液 氚-胸腺嘧啶核苷 氚標記胸苷
顯微放射自顯影
實驗材料 小白鼠 試劑、試劑盒 酒精 二甲苯 Giemsa 染色液 乳膠 顯影液 定影液 氚-胸腺嘧啶核苷 氚標記胸苷
放射自顯影術
實驗材料DPX試劑、試劑盒顯影液停影浴液定影液硫代硫酸鈉洗液蘇木素磷酸緩沖液乙醇組織透明劑儀器、耗材蓋玻片實驗步驟建立培養1. 在蓋玻片、載玻片(Ninc,Bellco ) 或皮氏培養皿上建立幾份同樣的單層培養。2. 在 37°C 條件下培養,直至細胞到達適合標記時。加入核素3. 通常以 0.1~1
放射自顯影[術]
中文名稱放射自顯影[術]英文名稱autoradiography;radioautography定 義利用放射性同位素所產生的電離輻射對感光乳膠的氯化銀晶體而產生潛影,再經過顯影定影處理,把感光的氯化銀還原成黑色的銀顆粒,即可根據這些銀顆粒的部位和數量分析出標本中放射性示蹤物的分布,以進行定位和定量
放射自顯影術
? ? ? ? ? ? 實驗材料 DPX 試劑、試劑盒 顯影液 停影浴液 定影液 硫代硫酸鈉洗液
斑點和狹縫雜交
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 去離子甲酰胺 ? 甲醛(37%) ? 20XSSC ? NaOH ? 預雜交液
斑點和狹縫雜交
試劑、試劑盒 去離子甲酰胺 甲醛(37%) 20XSSC NaOH 預雜交液儀器、耗材 狹槽 點樣器 真空泵 可燙封塑料袋或雜交管 硝酸纖維 K 膜或尼龍膜 Whatman3MJV1 濾紙實驗步驟 一、材料與設備1) 狹槽2) 點樣器3) 真空泵4) 可燙封塑料袋或雜交管5) 硝酸纖維 K 膜或尼龍
純化的RNA的點雜交和狹線雜交
實驗方法原理?點雜交和狹線雜交技術(Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物(通常為帶電荷的尼龍膜)上固定幾種核酸樣品,然后用合適的探針與已固定的樣品雜交,并由此判斷靶序列的濃度。通過估計樣品點發射出 的信號的強度,與已知濃度的標準品信號強度 進行比較,確定待測樣品中靶
純化的RNA的點雜交和狹線雜交
點雜交和狹線雜交技術(Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物(通常為帶電荷的尼龍膜)上固定幾種核酸樣品,然后用合適的探針與已固定的樣品雜交,并由此判斷靶序列的濃度。通過估計樣品點發射出的信號的強度,與已知濃度的標準品信號強度 進行比較,確定待測樣品中靶序列的量。本實驗來源「分
純化的RNA的點雜交和狹線雜交
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 點雜交和狹線雜交技術(Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物(通常為帶電荷的尼龍膜)上固定幾種核酸樣品,然后用合適的探針與已固定的樣品雜交,并由此判斷靶序列的濃度。通過估計樣品點發射出 的信號的強
細胞雜交和選擇培養
? ? ?融合:細胞雜交之前,要分別準備好脾臟的B細胞懸液和小鼠骨髓瘤細胞(如SP2/0—Agl4細胞株)。免疫后的小鼠脾臟在無菌條件下破碎,將B細胞懸浮在沒有血清的培養液中(通常使用RPMIl640商品配制),并洗滌3次去掉小鼠的血清。SP2/0細胞是用加有10%胎牛或小牛血清培養的,每天更換新鮮
Northern雜交步驟和過程
Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝酸纖
5.4-斑點和狹縫雜交
RNA 的斑點和狹縫雜交分析能夠不經凝膠電泳就直接將 RNA 樣品點在硝酸纖維素膜或尼龍膜上,然后與放射性標記的探針雜交,定性或半定量地測定 RNA。最初是由 Kafatos 等人用于描述 RNA 的斑點雜交。但由于直接將 RNA 樣品點在硝酸纖維素膜上會產生圓斑,不便于比較,故人們采用狹槽的裝置點
放射自顯影和從測序凝膠上讀取-DNA-序列實驗
實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液、緩沖液和試劑的配方見附錄 1。將貯存液稀釋到合適的濃度。凝膠固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋酸放射性混合物放射性墨水或化學發光標記物參見附錄 9。可重復使用的放射性墨水主要是選擇 Strat
放射自顯影和從測序凝膠上讀取-DNA-序列實驗
本實驗介紹關于放射自顯影和從測序凝膠上讀取 DNA 序列的過程。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。實驗步驟材料緩沖液和溶液貯存液、緩沖液和試劑的配方見附錄 1。將貯存液稀釋到合適的濃度。凝膠固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋
放射自顯影和從測序凝膠上讀取-DNA-序列實驗
實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液、緩沖液和試劑的配方見附錄 1。將貯存液稀釋到合適的濃度。凝膠固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋酸放射性混合物放射性墨水或化學發光標記物參見附錄 9。可重復使用的放射性墨水主要是選擇 Stratagene 的冷光標記物(Glosos)。標記物能被多