PCR引物設計技巧
自從1985年美國PE—Cetus公司的人類遺傳研究室 Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應(PCP0 以來，PCR已經成為了分子生物學領域最基本也是最重要的技術手段之-[ I。然而能否找到一對合適的核苷酸片段作為引物，使其有效地擴增模板DNA序列，無疑決定著PCR的成敗。現在動物遺傳育種早已進入了分子時代，在基因水平尋求影響動物遺傳表型的新基因突顯重要，因此引物設計無疑又成為了尋找新基因的重中之重。1 引物的設計以及初步篩選引物的設計與初步篩選基本上通過一些分子生物學軟件和相關網站來完成的， 目前運用軟件Primer Premier 5 或美國 whitehead 生物醫學研究所基因組研究中心在因特網上提供的一款免費在線PCR引物設計程序 Primer 3來設計引物，再用軟件Oligo 6進行引物評估，就可以初步獲得一組比較滿意的引物。但是對于初學者來說，運用軟件和程序來設計引物好象無從著手，其實只要我們掌握了引物......閱讀全文
PCR引物設計技巧
自從1985年美國PE—Cetus公司的人類遺傳研究室 Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應（PCP0 以來，PCR已經成為了分子生物學領域zui基本也是zui重要的技術手段之-[ I。然而能否找到一對合適的核苷酸片段作為引物，使其有效地擴增模板DNA序列，無疑決定著PCR的成敗。現在動
PCR引物設計技巧
自從1985年美國PE—Cetus公司的人類遺傳研究室 Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應(PCP0 以來，PCR已經成為了分子生物學領域最基本也是最重要的技術手段之-[ I。然而能否找到一對合適的核苷酸片段作為引物，使其有效地擴增模板DNA序列，無疑決定著PCR的成敗。現在動物遺傳育
PCR引物設計技巧
自從1985年美國PE-Cetus公司的人類遺傳研究室 Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應（PCP） 以來，PCR已經成為了分子生物學領域最基本也是最重要的技術手段之一 。然而能否找到一對合適的核苷酸片段作為引物，使其有效地擴增模板DNA序列，無疑決定著PCR的成敗。現在動物遺
PCR引物設計知識與技巧分析
PCR引物設計知識與技巧分析自從1985年Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈式反應（PCP） 以來，PCR已經成為了分子生物學領域zui基本也是zui重要的技術手段之一。然而能否找到一對合適的核苷酸片段作為引物，使其有效地擴增模板DNA序列，無疑決定著PCR的成敗。現在動物遺傳育種早已進入
PCR引物設計及軟件使用技巧
PCR引物設計及軟件使用技巧張新宇，朱有康，高燕寧（中國協和醫科大學中國醫學科學院腫瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介紹使用軟件設計PCR引物的技巧。在PCR引物設計原則的基礎上，詳細介紹了兩種常用引物設計軟件的基本使用方法，并對其各自的優缺點進行了比較。一般性引物自動搜索可采用“Prem
引物設計重點因素及設計技巧
想把引物合成的比較好，除了前引物和后引物的Tm不能相差太大，我們還要重點考慮以下因素： 一、GC含量 引物的GC含量一般為40-60%，以45-55%為宜，過高或過低都不利于引發反應。有一些模板本身的GC含量偏低或偏高，導致引物的GC含量不能在上述范圍內，這時應盡量使上下游引物的GC
引物設計重點因素及設計技巧
想把引物合成的比較好，除了前引物和后引物的Tm不能相差太大，我們還要重點考慮以下因素： 一、GC含量 引物的GC含量一般為40-60%，以45-55%為宜，過高或過低都不利于引發反應。有一些模板本身的GC含量偏低或偏高，導致引物的GC含量不能在上述范圍內，這時應盡量使上下游引物的GC
引物設計重點因素及設計技巧
想把引物合成的比較好，除了前引物和后引物的Tm不能相差太大，我們還要重點考慮以下因素：一、GC含量引物的GC含量一般為40-60%，以45-55%為宜，過高或過低都不利于引發反應。有一些模板本身的GC含量偏低或偏高，導致引物的GC含量不能在上述范圍內，這時應盡量使上下游引物的GC 含量以及Tm
PCR引物設計原則
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那就可以在
PCR引物設計原則
實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發DNA 聚合反應(即錯配) ，再次引物與引物之間避免形成穩定的二聚體或發夾結構。引物設計應注意如下要點：1．引物的長度一般為15-30 bp，常用的是18-27 bp。2．引物序列在模板內應當沒有相似性較高，尤其是3’端相似性
PCR引物設計原則
實驗概要PCR是目前研究DNA、RNA等核酸的非常有效和最主要的方法之一。本Protocol對于PCR引物設計中的一些基本原則給予闡述，希望能對廣大研究人員的研究工作帶來方便。實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發DNA 聚合反應(即錯配) ，再次引物與引物之間避
PCR引物設計原則
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。? 要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那
PCR引物設計原則
? PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那就可
普通pcr引物設計和熒光定量pcr引物設計的區別
一、方法不同1、普通pcr引物設計：引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。2、熒光定量pcr引物設計：通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，標記跟蹤PCR產物進行實時監測反應，利用與之相適應的軟件對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度二、原理不同1、普通pcr引物設計：為了找到一對合適的核
PCR引物設計及評價
【實驗目的】1、掌握引物設計的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0軟件進行引物搜索。2、掌握使用軟件oligo6.0對設計的引物進行評價分析。【實驗原理】一、引物設計原則聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或
PCR引物設計原則
PCR-引物設計原則 ? 1.引物最好在模板cDNA的保守區內設計。 DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。 2.引物長度一般在15~30堿基之間。
PCR的引物怎樣設計
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那就可以在
PCR儀引物設計原則
引物長度要滿足特異性需要,一般可在18~25個堿基之間；擴增長片段時最好在24~30個堿基之間； · 當引入克隆位點時,引物末端應額外增加3個以上堿基； · (G+C)%含量應盡量控制在40~60%,兩條引物的(G+C)%含量應盡量接近； · 引物中GC堿基分布均勻； · 盡量避免相同堿
PCR引物設計原則
1.引物最好在模板cDNA的保守區內設計。DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。2.引物長度一般在15~30堿基之間。引物長度（primer leng
PCR－引物設計黃金法則
1.引物最好在模板cDNA?的保守區內設計。????? DNA?序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI?上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。?2.引物長度一般在15~30?堿基之間。?????
PCR引物設計原則簡介
實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發DNA 聚合反應(即錯配) ，再次引物與引物之間避免形成穩定的二聚體或發夾結構。引物設計應注意如下要點：1．引物的長度一般為15-30 bp，常用的是18-27 bp。2．引物序列在模板內應當沒有相似性較高，尤其是3’端相似性
如何設計PCR引物(二)
上回說到如何尋找保守序列，經過隆地熊我一番羅嗦，七七八八也該知道了些。當然，要想做到爐火純青，各位小白還得勤加練習。本回隆地熊我就要進入正題了，不然對不起這圖文題目。在做PCR引物設計前，首先得了解引物設計的基本原則。根據網上資料匯總（主要來自生物谷、生物秀、小木蟲、百度文庫等，特此一并感謝，具體不
PCR引物設計及評價
【實驗目的】1、掌握引物設計的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0軟件進行引物搜索。2、掌握使用軟件oligo6.0對設計的引物進行評價分析。【實驗原理】一、引物設計原則聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或
如何設計PCR引物（一）
“如何設計PCR引物”看到這個題目后肯定有問“什么是PCR”的。對于這個問題，連小白都知道，您不知道，就只好去找百度哥咯。雖然百度哥肚子里其他的信息亂七八糟的，但是這個問題的答案還是蠻統一的，不會有誤導性，但問無妨。另外，也可以看看下圖老外給的簡介，英文不好請有道。跟“服裝設計”類似，設計PCR引物
設計引物遵循原則、引物保存和各種PCR的引物設計
一 設計引物應遵循以下原則1 、引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。2 、引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。3 、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上
PCR技術要素引物設計原則
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物內
PCR引物設計及評價實驗
實驗方法原理聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法，故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多，最廣泛的手段之一，而引物設計是PCR技術中至關重要的一環，使用不合適的PCR引物容易導致實
熒光實時定量PCR引物設計
靶的選擇和試驗設計1.針對目的基因序列選擇合適的擴增片斷查看以下三個網站是否有合適的已經證實的QRT-PCR的擴增引物,探針以及反應條件.RTPrimerDB (http://medgen.ugent.be/rtprimerdb), 相對物種較多PrimerBank (http://pga.mgh.
PCR引物設計全攻略
1. 引物最好在模板cDNA的保守區內設計。DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。2. 引物長度一般在15~30堿基之間。引物長度（primer le
熒光實時定量PCR引物設計
靶的選擇和試驗設計 1.針對目的基因序列選擇合適的擴增片斷 查看以下三個網站是否有合適的已經證實的QRT-PCR的擴增引物,探針以及反應條件. RTPrimerDB (http://medgen.ugent.be/rtprimerdb), 相對物種較多 PrimerBa