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基礎培養基 牛肉膏 5g 脙胨 5g 三號膽鹽 3.5g 瓊脂 17g 蒸餾水 1000mL 再將兩液混合，121℃高壓滅菌15min，保存備用。完全培養基 基礎培養基 100mL 乳糖 10g 檸檬酸鈉 8.5g 硫代硫酸鈉 8.5g 10%檸檬酸鐵溶液 10mL 1%中性紅溶液 2.5mL 0.1%煌綠溶液 0.33mL 加熱溶化基礎培養基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均勻，校正至pH7.0，加入中 性紅和煌綠溶液，傾注平板。 注：①制好的培養基宜當日使用，或保存于冰箱內于48h內使用。 ②煌綠溶液配好后應在10d以內使用。 ③可以購用SS瓊脂的干燥培養基。......閱讀全文
對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成（由噬菌體 SP6、T3 和 T7 編碼的依賴于 DNA 的 RNA 聚合酶來完成）的模板以及 PCR 的模板。本
羥乙基修飾的瓊脂糖可降低鏈間的氫鍵數目，并可在比標準瓊脂糖更低的溫度下熔化和凝固。多糖鏈上這種替換發生的程度決定了瓊脂糖熔化與凝結的確切溫度。這一特性構成了從凝膠中回收及操作 DNA 的基礎（Wielander 1979; Parker and Seed, 1980)。 本實驗來源「分子克隆實驗指南
實驗方法原理 對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可用作限制
噬菌斑起源于單個噬菌體顆粒對單個細菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒顆粒吸附和感染鄰近細菌，后者依次釋放另一代子代病毒顆粒。如果細菌生長在半固體培養基（如含瓊脂糖或瓊脂）上，這種子代病毒顆粒的擴散是有限的。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理噬菌斑起源于單個噬菌體顆粒對單個
獨體—基于纖連蛋白類型Ⅲ結構域框架的抗體模擬 Akiko Koide and Shohei Koide
實驗材料pAS38pAS45pAS47試劑、試劑盒聚乙二醇（PEG) 氯化鈉溶液HEPES 緩沖液涂布溶液Tris 緩沖鹽水TBS-Tween-20瓊脂糖-磷酸溶液儀器、耗材LBSOCYT實驗步驟3.1 實物庫構建我們用 Kunkel 突變技術構建大多數的實物庫雖然我們證明了 AB 鏈套
親和層析方法幾乎可以將麥芽糖結合融合蛋白純化成單組分。麥芽糖結合蛋自（MBP) 是一個由大腸桿菌 malE 基因編碼的周質蛋白，是細菌麥芽糖轉運系統的成員之一。MBP 能結合微摩爾水平的麥芽糖和麥芽糊精，因此可用交聯了麥芽糖的瓊脂糖進行純化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J
實驗方法原理 羥乙基修飾的瓊脂糖可降低鏈間的氫鍵數目，并可在比標準瓊脂糖更低的溫度下熔化和凝固。多糖鏈上這種替換發生的程度決定了瓊脂糖熔化與凝結的確切溫度。這 一特性構成了從凝膠
來源于單個噬菌斑的 λ 噬菌體原種的制備，通常有兩種方法：① 平板裂解，這是一種噬菌體在生長于頂層瓊脂或瓊脂糖的細菌中增殖的方法；② 小量液體培養，這是用生長于液體培養基中的細菌進行噬菌體增殖的方法。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理來源于單個噬菌斑的 λ 噬菌體原種的制備
實驗方法原理 噬菌斑起源于單個噬菌體顆粒對單個細菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒顆粒吸附和感染鄰近細菌，后者依次釋放另一代子代病毒顆粒。如果細菌生長在半固體培養基（如含瓊脂糖或瓊
實驗材料 表達 BMP 融合蛋白的大腸桿菌細胞 試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖
本方案敘述了從培養細胞和組織制備 DNA 樣品的方法。病人或動物來源的白細胞也能用作 PFGE 的高分子質量 DNA 樣品。如果確有必要，DNA 也可以從哺乳動物細胞分離出的胞核制備。經驗表明：從胞核制備 DNA 沒有優點，因為從完整細胞制備的 DNA 同樣易于酶切。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三
通過平板培養可對重組噬菌體文庫進行擴增，平板培養的原種可直接來源于本方案所述的包裝混合物。但只要可能，該擴增過程可被省略，而感興趣的 DNA 序列可從原始文庫直接篩選。擴增將不可避免地降低文庫的復雜性，部分原因在于在連續幾輪的噬菌體生長中，對生長緩慢的重組噬菌體來說是十分不利的。本實驗來源「分子克隆
λ噬菌體重組體編碼的融合蛋白可通過大腸桿菌株 Y1089 溶源化菌落來制備。但從大量單個噬菌斑制備溶源菌工作量大，且并不一定每次成功（Huynh et al.1985)。另外，裂解性噬菌體感染可通過軟瓊脂（本方案）或液體培養（方案 9) 獲得。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕
實驗方法原理 本方案敘述了從培養細胞和組織制備 DNA 樣品的方法。病人或動物來源的白細胞也能用作 PFGE 的高分子質量 DNA 樣品。如果確有必要，DNA 也可以從哺乳動物細
實驗方法原理 通過平板培養可對重組噬菌體文庫進行擴增，平板培養的原種可直接來源于本方案所述的包裝混合物。但只要可能，該擴增過程可被省略，而感興趣的 DNA 序列可從原始文庫直
實驗方法原理 來源于單個噬菌斑的 λ 噬菌體原種的制備，通常有兩種方法：① 平板裂解，這是一種噬菌體在生長于頂層瓊脂或瓊脂糖的細菌中增殖的方法；② 小量液體培養，這是用生長于液體培養
這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特定的重組體被多次用于制備反射性標記探針或構建大量定點突變體時。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這個方案主
pGEX 載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽 S 轉移酶融合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料表達 GST 融合蛋白的大腸桿菌細胞試劑、試劑盒二硫蘇糖醇谷胱甘肽洗脫緩沖液磷酸緩沖鈉鹽溶液Tri
這一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法（Blin and Stanfford 1976)。 當需要大量哺乳動物 DNA，如用于 Somhern 雜交或者用噬菌體 λ 載體構建基因組文庫時，應選用這一方法。從 5X107 培養的非整倍體細胞 ( 如 HeLa 細
實驗材料 表達 GST 融合蛋白的大腸桿菌細胞 試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇
實驗方法原理 這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特
實驗方法原理 這一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法（Blin and Stanfford 1976)。 當需要大量哺乳動物 DNA，如用于 Somhe
Sephacryl S-1000 層析是一個可供選擇的將質粒 DNA 與小分子核酸（DNA 和 RNA ) 分離的方法。這一方法由波士頓麻省總醫院的 F.DeNoto 和 H.Goodman 首先采用，后來由 Gomez-Marquez 等總結成論文發表于 1987 年。本實驗來源「分子克隆實驗指南
實驗材料 λgtll 噬菌體重組體 E.coli Y1090 hsdR 菌株 試劑、試劑盒
本章描述了改進融合蛋白在 M13 噬菌體顆粒表面展示水平的一個方法。向 M13 衣殼錨定蛋白引入突變后，蛋白質展示水平約能增加兩個數量級。本實驗來源「現代蛋白質工程實驗指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒編著。實驗材料羧芐青霉素氯霉素大腸桿菌 CJ236試劑、試劑盒生理磷酸緩沖液超純甘油PBS-
通過一種有效的蛋白酶（如蛋白酶 K ) 的消化作用及隨后的酚：氯仿抽提，就能從大規模制備的 λ 噬菌體中很好地分離到 DNA。該方法也適用于小量（50~100 ml ) 制備物。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理通過一種有效的蛋白酶（如蛋白酶 K ) 的消化作用及隨后的酚：
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 乙醇 氯化鈉 苯酚 醋酸鈉 TE 瓊
經典的 Kunfcel 寡核苷酸指導的誘變方法利用大腸桿菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特異地篩除去含尿嘧啶堿基的 DNA 的選擇性作用（請參考寡核苷酸誘變信息欄）。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒緩
實驗方法原理 Sephacryl S-1000 層析是一個可供選擇的將質粒 DNA 與小分子核酸（DNA 和 RNA ) 分離的方法。這一方法由波士頓麻省總醫院的 F.DeNot