WIKI資訊
通過大腸桿菌表達目的基因大量獲得重組蛋白是一個方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特異設計的質粒載體上，受噬菌體T7強啟動子控制；表達由宿主細胞提供的T7 RNA聚合酶誘導。當需要表達蛋白時，在細菌培養基中加入IPTG來啟動表達。不同載體在鄰近克隆位點處具有編碼不同的多肽“標簽”的序列，在定位、檢測或純化目的蛋白時提供方便。以pET-32a(+)為例，介紹將目的基因克隆進載體并進行表達獲得重組蛋白的過程，從而熟悉根據自己的要求采用不同的載體進行原核表達的全過程。1.準備工作（試劑配置和器材準備）1) 操作流程示意圖主要步驟 操作①制備pET-32a(+)載體 用限制性酶消化，去磷酸化后膠純化回收②制備插入DNA PCR裝入質粒后進行限制性消化，再回收③插入片段克隆到pET-32a(+)載體 插入片段與pET連接，轉化④轉化表達宿主菌BL21 轉化帶有T7RNA聚合酶基因的菌株⑤ 誘導表達目的蛋白 SDS-PAGE......閱讀全文
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。 1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性
蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同，適合表
在基因表達研究中，研究者比較注意選擇合適的表達載體和宿主系統，而往往忽視基因本身是否與載體和宿主系統為最佳匹配這樣一個實質性問題。基因的最佳化表達可以通過對基因的重新設計和合成來實現，如消除稀有密碼子而利用最佳化密碼子，二級結構最小化，調整GC含量等。以下就密碼子最佳化、翻譯終止效率和真核細胞
在基因表達研究中，研究者比較注意選擇合適的表達載體和宿主系統，而往往忽視基因本身是否與載體和宿主系統為最佳匹配這樣一個實質性問題。基因的最佳化表達可以通過對基因的重新設計和合成來實現，如消除稀有密碼子而利用最佳化密碼子，二級結構最小化，調整GC含量等。以下就密碼子最佳化、翻譯終止效率和真
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具。需要使用表達系統來對其進行制備。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質。作者： 伯吉斯等,主譯：陳薇，本實驗來自「蛋白質純化指南」實驗步驟一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及
實驗步驟 一、引言 選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或
一、受體細胞 ：受體細胞的選擇是否合適將關系到能否表達，特別是高效表達。首先要注意不同的表達載體與受體細胞的關系，即原核表達載體適合原核細胞，真核載體則適合真核細胞，而農桿菌僅適用于植物細胞。即使大腸桿菌質粒，也應注意選擇合適的菌種。例如，當用含有T7 噬菌體啟動子的載體表達外源基因時，由于T7
3.2 基因工程合成法 利用基因工程的方法生產多肽抗生素是降低生產成本的一條有效途徑。但是多肽抗生素對原核細胞的毒性在一定程度上限制了其在原核表達系統中的應用。而真核表達系統的較低表達效率也是其工業化生產的一個障礙。為了克服多肽抗生素對細菌細胞的毒性，人們采用融合表達或選擇對多肽抗生素具有抗性的株系
來自北京大學的消息，北大生命科學學院王憶平課題組通過生物信息學、分子遺傳學及生物化學等手段，對銅綠假單胞菌mexAB-oprM操縱子的表達調控進行了深入研究，發現了一種有趣“嘔吐”機制，也就是說當細菌遭到抗生素攻擊導致其細胞膜出現威脅生命的異常時，細菌將及時感應到的危機信號傳輸給CpxR蛋白，激
自核糖開關(riboswitch)最早被Winkler等人于2002年發現并命名以來，這一關鍵調控元件的研究歷程已經走過了十年，近期來自復旦大學上海醫學院，藥學系等處的研究人員發現了一種廣泛分布于具有抗生素耐藥性細菌病原體中的新型核糖開關：氨基糖苷結合核糖開關，相關成果公布在1月17日的 C
在抗體研究的漫長過程中,相繼發展了三代不同水平的抗體制備技術?其中以抗原免疫高等脊椎動物制備的多克隆抗體,稱為第一代抗體;通過雜交瘤技術生產的只針對某一種特定抗原決定簇的單克隆抗體,稱為第二代抗體;應用重組DNA技術或是基因突變的方法改造某種抗體基因的編碼序列,使之產生出自然界中原本存在的抗體蛋白質
模式生物是可用于研究與揭示生命體某種具有普遍規律的生物現象的一類生物。有3大特點：有利于回答研究者關注的問題，生理特征能夠代表生物界的某一大類群；世代短、子代多、易于在實驗室內飼養繁殖、遺傳背景清楚；容易進行實驗操作，特別是遺傳操作以及表型分析下面我們來看看有哪些經典的模式生物：大腸桿菌
用于生物制藥的轉基因生物反應器包括轉基因微生物、轉基因植物細胞、轉基因動物細胞以及轉基因的動物和植物。 從DNA重組技術誕生以來，作為現代生物技術核心的基因工程技術得到迅速的發展。由于微生物具有結構簡單、繁殖迅速、容易培養等特點，而成為良好的轉基因對象。，可以將目的基因通過適當改建后導人大
泛素化是一種重要的真核生物蛋白質翻譯后修飾方式，它決定了被修飾蛋白的命運。 泛素化修飾的作用可概括為兩點：1.參與蛋白質降解；2.直接影響蛋白質的活性和定位。 泛素激活酶（E1）、泛素結合酶（E2）、泛素連接酶（E3）、去泛素化酶、蛋白酶體共同構成了泛素-蛋白酶體系統（UPS）。在細胞內，U
又是一年春到來，隨著三月春風拂來，生命科學領域一片欣欣向榮之態，在這個月里首先吸引住眼球的就是基因組編輯技術的大邁進，另外非公開發表論文的研究突破當屬澳洲科學家首次利用核移植技術，復活了八十年代滅絕動物，各色精彩，值得品鑒。 首先關于CRISPR/Cas系統新技術，在去年的這個時候，“CRIS
（四）分子病毒學的研究時期 自從1953年DNA雙螺旋結構理論建立以來，由于分子生物學的迅速發展，新技術和新方法的應用，使得病毒學的研究步入了分子病毒學的發展時期。50年代至60年代是分子生物學的奠基時代，而病毒特別是噬菌體和植物病毒為此做出了巨大的貢獻,因此分子病毒學也正是分子生物學的發展過程中
7月21日，Angewandte Chemie International Edition在線發表了中科院生物物理研究所王江云研究組題為Expanding the Genetic Code for Photoclick Chemistry in E. coli, Mammalian Ce
如今，一群不食人間煙火的孩子——苯丙酮尿癥患兒引起社會越來越多的關注。此前，青海省呼吁將苯丙酮尿癥納入醫保，黑龍江省也決定將苯丙酮尿癥納入城鄉居民基本醫療保險門診特殊治療管理范圍。 何為苯丙酮尿癥 苯丙酮尿癥為常染色體隱性遺傳疾病，也是一種常見的氨基酸遺傳代謝障礙疾病。目前，我國苯丙酮尿癥發
編 號 論文題目 作 者
用反義RNA分子來調節基因表達時，經常會遇到的困難是反應模板的穩定性差。因此，人們正在探索如何改進反義基因的新方法，目前主要有：（1）優化反義RNA的結合。反義RNA鏈的長度對抑制基因的效果是重要的。雙螺旋形成過程中將釋放能量，RNA鏈越長，釋放的自由能越多。從這一意義來講，可以說長RNA作為反義R
轉基因食品：到底安全還是不安全 ——訪中國農業生物技術學會常務副理事長林敏 關注轉基因 在轉基因食品安全問題上已有共識 科技日報：目前在轉基因食品安全問題上，國際上是否已經達成共識? 林敏：目前,有轉基因安全無定論的說法，是因為混淆了轉基因技術、研發中的轉基因產品與通過安全評價
模式生物由于其結構簡單、生活周期短、培養簡單、基因組小等特點，在生物醫學等領域發揮重要作用。模式生物作為材料不僅能回答生命科學研究中最基本的生物學問題，對人類一些疾病的治療也有借鑒意義。常見的模式生物有有真菌中的酵母，原核生物中的大腸桿菌，低等無脊椎動物中的線蟲，昆蟲綱的果蠅，魚綱的斑馬魚，哺乳綱的
雙鏈DNA在轉錄過程中打開，其中一條鏈生成作為蛋白翻譯模板的信使RNA。偶爾，另一條DNA也能產生一個反義的RNA分子(asRNA)，這種反義RNA的序列與信使RNA互補。許多細胞中都存在這樣的asRNA，但人們并不了解這些分子有何功能。近日，科學家們開發了一個分離和鑒定反義RNA的新
合成生物學的目標之一就是構建那些復雜的人工合成有機體。目前，在酵母細胞中已經取得了階段性的進展——采用分段式方法，研究者已經可以將整個酵母染色體轉化成為合成序列了。 生物細胞其實很像是一臺計算機——基因組可以比作軟件，它負責對細胞的構成進行編碼，細胞器則猶如計算機的硬件，負責讀取并運行軟件的
日前，中科院分子植物科學卓越創新中心/植物生理生態研究所合成生物學重點實驗室覃重軍研究團隊與合作者，在國際上首次人工創建了單條染色體的真核細胞：把釀酒酵母細胞里原本天然的16條染色體，人工融合成單條染色體，且仍具有正常的細胞功能。既改變了染色體的結構，又仍保有生命的“活性”，人工蛻變出一個全新細