牛血清蛋白的測定方法以及用途

   牛血清白蛋白的相對分子質量為10的4次方這個級別，它不是一定的，而是多聚物的，有的地方測試

牛血清白蛋白分子式數據為70 000，這一數據是在做PCR的時候使用的數據。

    牛血清白蛋白是血液中的主要成分（38g/100ml），分子量68kD，等電點4.8，含氮量16%，含糖量0.08%，僅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成，其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質結合。牛血清蛋白溶液可以作為測量蛋白質含量的標準曲線用。

  一般買回來的牛血清蛋白是細小片狀的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以鐵為基本原料。

用途

1、特純級牛血清蛋白

用途：用作酶標、金標等診斷試劑的封閉劑，生化試驗等。

電場対超感牛血清白蛋白截留率的影響

性狀：淡黃色干燥粉末

2、無脂肪酸牛血清蛋白

用途：用作酶標、金標等診斷試劑的封閉劑、保護劑，尤其適用于容易受脂肪酸影響的產品和試驗。

性狀：淡黃色干燥粉末

3、無蛋白酶牛血清蛋白

用途：用于酶標、金標等診斷試劑的封閉劑、保護劑，尤其適合血液脂類的診斷試驗、脂類診斷試劑及對純度要求高的產品。

性狀：淡黃色干燥粉末

4、細胞培養級牛血清蛋白

用途：無血清培養基的蛋白添加劑，供細胞培養使用。

性狀：淡黃色干燥粉末白蛋白

測定

標準曲線

一般用分光光度法測物質的含量，先要制作標準曲線，然后根據標準曲線查出所測物質的含量。因此，制作標準曲線是生物檢測分析的一項基本技術  。

測定方法

1. 凱氏定氮法

2. 雙縮脲法

3. Folin-酚試劑法

4. 紫外吸收法

5. 考馬斯亮藍法

試劑

1. 考馬斯亮藍試劑：

考馬斯亮藍G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾。zui終試劑中含0.01%（W/V）考馬斯亮藍G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。

2. 標準蛋白質溶液：

純的牛血清血蛋白，預先經微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，根據其純度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。

器材

1. 722S型分光光度計使用及原理。

2. 移液管使用。

制作步驟

試管編號 0 1 2 3 4 5 6

100ug/ml標準蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4

考馬斯亮藍試劑 （ml） 5 5 5 5 5 5 5

搖勻，1h內以1號管為空白對照,在595nm處比色

3、以A595nm為縱坐標，標準蛋白含量為橫坐標（六個點為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐標軸上繪制標準曲線。

（1）、利用標準曲線查出回歸方程。

（2）、用公式計算回歸方程。

（3）、或用origin作圖 ，測出回歸線性方程。即A595nm=a×X( )+6

一般相關系數應過0.999以上，至少2個9以上。

(4）、繪圖時近兩使點在一條直線上，在直線上的點應該在直線兩側。

含量的測定

樣品即所測蛋白質含量樣品（含量應處理在所測范圍內），依照操作步驟1操作，測出樣品的A595nm，然后利用標準曲線或回歸方程求出樣品蛋白質含量。

一般被測樣品的A595nm值在0.1—0.05之間，所以上述樣品如果A595nm值太大，可以稀釋后再測A595nm值，然后再計算。

注意事項

1. 玻璃儀器要洗滌干凈。

2. 取量要準確。

3. 玻璃儀器要干燥，避免溫度變化。

4. 對照：用被測物質以外的物質作空白對照