放線菌形態的觀察實驗

實驗方法原理 放線菌是由不同長短的纖細的菌絲所形成的單細胞菌絲體。菌絲體分為兩部分，即潛入培養基中的營養菌絲（或稱基內菌絲）和生長在培養基表面的氣生菌絲。有些氣生菌絲分化成各種孢子絲，呈螺旋形、波浪形或分枝狀等。孢子常呈圓形、橢圓形或桿形。氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為分類的重要依據。

實驗材料 細黃鏈霉菌灰色鏈霉菌弗氏鏈霉菌

試劑、試劑盒 石炭酸復紅染液呂氏堿性美藍染液加拿大樹膠玻璃紙高氏1號培養基

儀器、耗材 顯微鏡載玻片蓋玻片玻璃棒接種鏟小刀鑷子

實驗步驟

1.  放線菌自然生長狀態的觀察

（1）將滅菌后的高氏1號培養基倒入培養皿，每皿倒15 ml 左右，凝固后備用。

（2）用經火焰滅過菌的小鑷子將滅菌優質玻璃紙平鋪在平皿培養基上，如果瓊脂培養基和玻璃紙之間有氣泡，可以用滅過菌的玻璃棒將氣泡除去。

（3）將3~5 ml 無菌水倒入弗氏鏈霉菌的斜面培養物里，制成菌懸液，再適當稀釋。

（4）用無菌吸管取0.1 ml 的孢子懸液稀釋液，接種在玻璃紙上，并用無菌玻璃棒涂勻后，置28℃培養，直至菌長好，備用。

（5）在潔凈的載玻片上滴一小滴水，稍涂布。取出培養皿，打開皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養基分開，再用剪刀剪取小片長有菌的玻璃紙，菌面朝上放在載玻片的水面上，使紙平貼載玻片。

（6）將載玻片置顯微鏡下觀察。

2.  營養菌絲的觀察

（1）用接種鏟連同培養基挑取細黃鏈霉菌菌苔置載玻片中央。

（2）用另一載玻片將其壓碎，棄去培養基，制成涂片，干燥、固定。

（3）用呂氏堿性美藍染液或石炭酸復紅染液染0.5~1分鐘，水洗。

（4）干燥后，用油鏡觀察營養菌絲的形態。

3.  氣生菌絲與營養菌絲的比較觀察

（1）將高氏1號培養基倒入無菌培養皿，制成4 mm 左右的培養基平板，經培養檢驗后無菌，備用。

（2）用火焰滅菌的鑷子將無菌蓋玻片以45度傾斜角插入平皿培養基瓊脂內，然后將細黃鏈霉菌的孢子懸液（濃度以稀釋10-2~10-3為好），接種在蓋玻片與平皿培養基的界面上。

（3）倒置于28℃培養4~5天后，小心地將蓋玻片取出，把有菌的一面朝上，放在載玻片上，置顯微鏡下進行觀察。一般情況是氣生菌絲顏色較深，并比營養菌絲粗二倍左右。

4.  孢子絲及孢子的觀察

（1）將培養3~4天的細黃鏈霉菌的培養皿打開，放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣，直接觀察氣生菌絲和孢子絲的形態，注意其分枝情況、卷曲情況等。

（2）取清潔的蓋玻片一塊，在菌落上面輕輕按壓一下，然后將印有痕跡的一面朝下放在有一滴呂氏堿性美藍染液的載玻片上，將孢子等印浸在染液中，制成印片。用油鏡觀

察孢子的形狀、孢子絲等。

（3）取干凈載玻片一塊，在玻片中央加一小滴加拿大樹膠，使樹膠攤成一薄層，放置數分鐘，使略微晾干（但不要過分干燥）。然后用小刀切取細黃鏈霉菌培養體一塊（帶培養基切下）。將培養體表面貼在涂有樹膠的玻片上，用另一玻片輕輕按壓（不要壓碎），然后將放線菌培養體小心棄去，注意不要使培養體在玻片上滑動，否則印痕模糊不清。將制好的印片通過火焰固定，用石炭酸復紅染色1分鐘，水洗，晾干（不能用吸水紙吸干）。用油鏡觀察孢子絲的形態及孢子排列情況。

注意事項

玻璃紙滅菌方法在玻璃紙滅菌時，若直接將干燥的玻璃紙滅菌，它就會縮小，不便使用。故需作如下處理：將玻璃紙和濾紙剪成培養皿大小的圓形紙片，用水浸泡后把濕濾紙和玻璃紙交互重疊地放在培養皿中，借濾紙將玻璃紙隔開。然后進行濕熱滅菌，備用。