nanodrop和紫外分光光度計的區別

一、產品應用

ND-2000是目前國內外實驗室中使用最為廣泛的一款微量分光光度計，其優越的性能、準確的結果贏得了廣大用戶的好評。

該產品可用于以下幾個方面：

* 紫外檢測：常規紫外光波長下檢測樣品吸光值；

* 核酸檢測：可檢測dsDNA、ssDNA、RNA等不同類型核酸的濃度及其在260nm、280nm處的吸光值；

* 探針檢測：檢測熒光標記探針的吸光值，可用于去除未能標記探針的樣品；

* 細胞培養物檢測：檢測細胞培養物在600nm處的吸光值；

* 蛋白檢測：檢測普通純化后蛋白的濃度和280nm處的吸光值；

* 蛋白標記檢測：可檢測被BCA、Bradford或Lowry標定的蛋白樣品，自動畫出標準曲線并計算出待測蛋白質濃度。

二、 產品簡介
NanoDrop 2000超微量分光光度計是NanoDrop的最新產品，應用液體的表面張力特性，樣品體積只需要 0.5~2ul，在檢測臺上，經上下臂的接觸拉出固定的光徑達到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細管等耗材檢測吸收值的優點。此產品設計受ZL保護，并在全世界廣受歡迎，其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究。

NanoDrop 2000使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光譜檢測，且不需要暖機，開機后立即使用。搭配高感度CCD array檢測器，檢測吸收值可高達300Abs（dsDNA濃度2~15000ng/ul），大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測。

待測樣品的均質性是NanoDrop 2000的最高要求，一般核酸、蛋白質樣品能在檢測前以vortex mixer震勻為最佳，若無vortex mixer也應以pipette吸放數次混勻。若擔心genomic DNA可能因前述動作而斷裂，則改以55?C加熱約一分鐘，使樣品在偵測前呈現均勻狀態，以確保 2ul 具有代表性。

檢測時選擇不同檢測模式，可以得到最快速的結果：
● Nucleic Acid ?C 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。

● UV-Vis ?C 190~840nm間所有波長的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現）。

● A280蛋白質定量法 ?C 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio及蛋白質濃度。僅適用于純化后的蛋白質，須具有已知的質量消光系數（mass extinction coefficient）方可計算。

● BCA、Bradford及Lowry ?C 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結果，自動畫出標準曲線并計算R square，待測蛋白質濃度。

* 蛋白質檢測模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑，因呈色劑隨時間會逐漸加深，使用前請詳閱試劑說明書并制備不同濃度的標準品，在最佳時間內完成檢測，以得到良好的標準曲線。每個標準曲線最多可有七個標準品，每個標準品最多可做五重復。

* 測蛋白質時樣品體積需使用 2ul，每個樣品檢測后需以Kimwipes 低塵擦拭紙（編號： 34155 ）擦拭15~20回，以避免呈色劑與蛋白質的殘留。

濃度范圍：

樣品種類

最低濃度

最高濃度

(超過時請稀釋樣品)

再現性 (五重復以上)

核酸

2 ng/ul

15000 ng/ul (dsDNA)

12000 ng/ul (RNA)

濃度范圍在 2-100 ng/ul 時，SD為 ± 2 ng/ul

濃度范圍大于 100 ng/ul 時，CV為 ± 2%

純BSA

0.10 mg/ml

100 mg/ml

濃度范圍在 0.05-10 mg/ml 時，SD為 ± 0.10 mg/ml

濃度大于 10 mg/ml 時，CV為 ± 2%

蛋白質，以BCA方式定量

0.2 mg/ml

8.0 mg/ml

CV：± 2% （在可偵測的濃度范圍內皆然）

蛋白質，以modified Lowry方式定量

0.2 mg/ml

4.0 mg/ml

CV：± 2% （在可偵測的濃度范圍內皆然）

蛋白質，以Bradford方式定量

100 ug/ml

8000 ug/ml

濃度范圍在 100-500 ug/ml 時，SD為 ± 25 ug/ml

濃度大于 500 ug/ml 時，CV為 ± 5%

蛋白質，以Mini Bradford方式定量

15 ug/ml

100 ug/ml

濃度范圍在 15-50 ug/ml 時，SD為 ± 4 ug/ml

濃度大于 50 ug/ml 時，CV為 ± 5%

三、技術參數：

1、波長范圍: 190-840nm；

2、波長精度: 1nm；

3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm)；

4、其它: 1mm光程長度（可自動調整到0.05mm）；

5、檢測下限：2ng/μl（dsDNA）；

6、檢測上限：15000ng/μl（dsDNA）；

7、吸光率精確度：0.002 absorbance (1mm光程)；

8、吸光率準確性：2%(at 0.76 at 257 nm)；

9、吸光率范圍：0.02-300 (相當于10mm光程)；

10、核酸檢測周期：< 5s；

11、體積：14cm×20cm。

四、使用方法舉例：

dsDNA：在主畫面點選Nucleic Acid，計算機與儀器自動完成聯機。依照DNA所溶于之液體準備該溶液（務必確認DNA溶于二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer）取出1.5 ul 點在偵測臺上，放下上臂后再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50，在Sample ID位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5 ul 點在偵測臺上，放下上臂后再按Measure。

五、結果整理：

NanoDrop2000 軟件在偵測一開始會詢問檔案欲存至何處，若未指定，則檔案會存在上一個使用者的檔案內。

六、注意事項：

1. 偵測后立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭臺面。先取一張將上下臺面的液體吸走，再將此laboratory wipe吸過樣品的面反折到內部，折迭四次后以單方向多次擦拭臺面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。

2. 同一滴液體只能做一次偵測，欲重復定量同一樣品，請擦掉前一滴，重新取出一滴進行偵測。

3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求，原則上不超過 2ul。并請使用2ul pipette避免體積不足導致液柱無法完整形成。唯蛋白質樣品因呈色劑與蛋白質本身特性，務必使用2ul進行偵測。

4. 當軟件跳出錯誤訊息時，請詳細閱讀并依指示進行障礙排除。最常發生的情形是在偵測過程液柱并未正確形成，軟件會出現以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下臺面，或樣品內有泡泡，將上臂拉起后，擦掉該滴樣品，再重新進行偵測，必要時可將樣品體積加大至2ul。

5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之腐蝕樣品，其它無腐蝕性之液體皆可使用。