性狀
本品為橙黃色結晶性粉末;幾乎無臭;有引濕性本品在水中溶解,在乙醇、三氯甲烷或乙醚中幾乎不溶。比旋度避光操作。取本品適量,精密稱定,加鹽酸溶液(45→-100)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含15mg的溶液,依法測定(通則0621),比旋度為+38.0°至+42.0°。
鑒別
(1)取本品約1mg,加水100ml溶解后,溶液在透射光下顯淡黃色并有強烈的黃綠色熒光;加無機酸或堿溶液,熒光即消失。(2)取本品適量,加磷酸鹽緩沖液(pH7.0)溶解并稀釋制成每1ml中含10g的溶液,照紫外-可見分光光度法(通則0401)測定,在267nm、372nm與444nm的波長處有最大吸收,在240nm的波長處有最小吸收。(3)本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜(光譜集628圖)一致。(4)取本品0.5g,加硝酸10ml,在水浴上蒸干,熾灼,殘渣加水5ml使溶解,必要時濾過,濾液顯鈉鹽的鑒別反應(通則0301)。
檢查
酸度取本品0.40g,加水20ml溶解后,依法測定(通則0631),pH值應為4.0~6.5。溶液的澄清度取本品0.20g,加水10m1溶解后,溶液應澄清。感光黃素取本品35mg,加無醇三氯甲烷10ml,振搖5分鐘,濾過,濾液照紫外可見分光光度法(通則0401),在440nm的波長處測定,吸光度不得過0.025。游離磷酸照紫外-可見分光光度法(通則0401)測定供試品溶液取本品0.20g(按干燥品計算),精密稱定,置100ml量瓶中,加水30ml,振搖使溶解;加鉬酸銨硫酸試液2.5ml與1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液(取無水亞硫酸鈉5g,亞硫酸氫鈉94.3g與1-氨基-2萘酚-4-磺酸0.7g,充分混合,臨用時取此混合物1.5g,加水10ml使溶解,必要時濾過)1ml,搖勻,用水稀釋至刻度,搖勻,在20℃放置30分鐘對照溶液精密量取磷酸鹽對照溶液匚精密稱取經105℃干燥2小時的磷酸二氫鉀0.42g,置1000ml量瓶中加硫酸溶液(3→10)10ml與水適量使溶解,用水稀釋至刻度,搖勻,臨用時再稀釋5倍]20ml,置100ml量瓶中,加水oml,搖勻;自“加鉬酸銨硫酸試液2.5ml”起,制備方法同供試品溶液。測定法取供試品溶液與對照溶液,在740nm的波長處分別測定吸光度。限度供試品溶液的吸光度不得大于對照溶液的吸光度有關物質照高效液相色譜法(通則0512)測定。避光操作。供試品溶液取本品10mg,精密稱定,置50ml量瓶中,加流動相適量,振搖使溶解,用流動相稀釋至刻度,搖勻對照溶液精密量取供試品溶液2ml,置50m量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻核黃素對照品溶液精密量取含量測定項下的核黃素對照品溶液1ml,置10ml量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。系統適用性溶液取核黃素磷酸鈉混合對照品10mg,置5oml量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻。色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.054mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇(85:15)為流動相;檢測波長為267nm;進樣體積20l。系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中,核黃素磷酸鈉峰的保留時間約為40分鐘;各色譜峰出峰順序如下表所示,核黃素磷酸鈉峰與4′-核黃素磷酸鈉峰之間的分離度應大于2.0。成分相對保留時間3′,4′-核黃素二磷酸酯0.23′,5′-核黃素二磷酸酯34′,5′-核黃素二磷酸酯0.53-核黃素磷酸鈉0.74′-核黃素磷酸鈉0.9核黃素磷酸鈉核黃素測定法精密量取供試品溶液、對照溶液與核黃素對照品溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2.5倍。限度供試品溶液色譜圖中如有與系統適用性溶液色譜圖中相對應的雜質峰,按外標法以峰面積計算。按干燥品計,核黃素二磷酸酯(按核黃素計)含量不得過6.0%,游離核黃素含量不得過6.0%。核黃素二磷酸酯與游離核黃素計算公式如下:∑A×W×1/10核黃素二磷酸酯A×W×(1-d)×100%A1×W,×1/10游離核黃素A×W1×(1-d)×100%式中∑A為供試品溶液色譜圖中3’,4′-核黃素二磷酸酯峰、3′,5′-核黃素二磷酸酯峰與4′,5′-核黃素二磷酸酯峰的峰面積之和;A1為供試品溶液色譜圖中游離核黃素峰的峰面積;A為核黃素對照品溶液色譜圖中核黃素峰面積;W為核黃素磷酸鈉供試品稱樣量;W為核黃素對照品稱樣量乘以對照品含量;d為干燥失重。供試品溶液色譜圖中除主成分峰、游離核黃素峰與核黃素二磷酸酯峰外,如有其他雜質峰,單個雜質不得大于對照溶液主峰面積的0.25倍(1.0%),其他雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積(4.0%)。干燥失重取本品約0.3g,在130℃千燥至恒重,減失重量不得過10.0%(通則0831)。