取供試品適量（相當于含氮量25～30mg），精密稱定，供試品如為固體或半固體，可用濾紙稱取，并連同濾紙置干燥的500ml凱氏燒瓶中；
然后依次加入硫酸鉀（或無水硫酸鈉）10g和硫酸銅粉末0.5g，再沿瓶壁緩緩加硫酸20ml；
在凱氏燒瓶口放一小漏斗并使凱氏燒瓶成45°斜置，用直火緩緩加熱，使溶液的溫度保持在沸點以下，等泡沸停止，強熱至沸騰，俟溶液成澄明的綠色后，除另有規定外，繼續加熱30分鐘，放冷。沿瓶壁緩緩加水250ml，振搖使混合，放冷后，加40%氫氧化鈉溶液75ml，注意使沿瓶壁流至瓶底，自成一液層，加鋅粒數粒，用氮氣球將凱氏燒瓶與冷凝管連接；
另取2%硼酸溶液50ml，置500ml錐形瓶中，加甲基紅-溴甲酚綠混合指示液10滴；
將冷凝管的下端插入硼酸溶液的液面下，輕輕擺動凱氏燒瓶，使溶液混合均勻，加熱蒸餾，至接收液的總體積約為250ml時，將冷凝管尖端提出液面，使蒸氣沖洗約1分鐘，用水淋洗尖端后停止蒸餾；
餾出液用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液由藍綠色變為灰紫色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相當于1.401mg的N。