如何進行人體染色體核型分析

一、實驗目的
　學習和掌握核型分析的方法。

二、實驗原理
核型亦稱染色體組型，是指體細胞有絲分裂中期細胞核(或染色體組)的表型。每一個體細胞含有兩組同樣的染色體，用2n表示。其中與性別直接有關的染色體，即性染色體，可以不成對。每一個配子帶有一組染色體，叫做單倍體，用n表示。兩性配子結合后，具有兩組染色體，成為二倍體的體細胞。如蠶豆的體細胞2n=12，它的配子n=6；玉米的體細胞2n=20，配子n=10；人類體細胞2n=46，配子n=23。
染色體在復制以后，縱向并列的兩個染色單體，通過著絲粒聯結在一起。著絲粒在染色體上的位置是固定的。由于著絲粒位置的不同，染色體可分成相等或不相等的兩臂，造成中間著絲粒，亞中間著絲粒、亞端部著絲粒和端部著絲粒等形態不同的染色體。此外，有的染色體還含有隨體或次級縊痕。所有這些染色體的特異性構成一個物種的染色體組型。染色體核型分析是細胞遺傳學、染色體工程、現代分類學和進化理論的重要研究手段，也是一種簡便的方法。

三、實驗材料
　蠶豆或蛙類染色體標本制片10張，或10個分裂中期細胞的染色體照片。

四、實驗器具和藥品試劑
放大機、顯影盆、游標卡尺、測微尺、剪刀、鑷子、計算器、座標紙、繪圖紙、膠水、3號放大相紙。
米吐爾、無水亞硫酸鈉、對苯二酚、硼砂、炭酸鈉、溴化鉀、大蘇打、鉀礬。

五、實驗方法和步驟
(一)測量 若用染色體制片標本進行直接測量時，必須利用顯微鏡與測微尺，事先要用臺微尺對目微尺的單位長度進行標定后再進行工作, 僅對染色體長度較大的標本適合。一般標本還是先行拍照放大后進行測量，可得較好數據。首先目測照片上每條染色體長度，按長短順序初步編號，寫在每條染色體短臂的一端，同時確定主縊痕的位置，用游標卡尺逐條測量短臂和長臂長度。根據測量的數據，計算染色體的相對長度，臂比及著絲粒指數。

相對長度=（每個染色體的長度/全部染色體長度）×100

臂比（率）=長臂長度/短臂長度

著絲粒指數=（短臂長度/該染色體長度）×100

說明：以上公式每一項所代入的數據，均為求出5個或10個細胞同源染色體的短臂長度、長臂長度和全長的平均值(即5個或10個細胞中編號相同的染色體各項長度分別相加后以5或10除之)。

著絲點位置按臂比值確定：

　臂比值
　著絲點位置
　簡寫

1.00

1.01－1.70

1.71－3.00

3.01－7.00

　7.01以上

∞
正中部著絲點

中部著絲點區

近中部著絲點區

近端部著絲點區

端部著絲點區

端部著絲點
　 M

　 m

sm

　 st

　 t

T

(二)配對 根據測量數據，即染色體相對長度、臂比、著絲粒指數、次縊痕的有無及位置，隨體的形狀和大小等進行同源染色體的剪貼配對。
(三)染色體排列 按染色體由長到短同源染色體重新編號, 由左向右順序貼在紙上。著絲點排列在同一水平線上，短臂在上，長臂在下。如有超數染色體、性染色體，則排在最后，完成上述步驟的染色體剪貼后, 再附一張同一照片的中期分裂相，即成為染色體核型圖。

(四)繪制核型模式圖及核型分析表
1．核型模式圖 用繪圖紙和座標紙繪制。座標紙放在繪圖紙下作為標記，橫座標為染色體序號，縱座標為染色體的相對長度。繪染色體時，長臂在下，短臂在上。
2．核型分析表