載體兩性電解質必備的條件:
1.可溶性要好,為了保證等電聚焦過程中PH梯度的形成和蛋白樣品的遷移,載體兩性電解質必須具有很好的溶解性能。
2.紫外吸收低,不發熒光。由于制備分離時,檢測蛋白質的方法通常是測量280cm的吸光度,因此要求載體兩性電解質在280cm的吸光度盡可能低。
3.在等電點處必需有足夠的緩沖能力,以便能控制pH梯度,而不致被樣品蛋白質或其他兩性物質的緩沖能力改變pH梯度的進程。
4.在等電點必需的足夠高電導,以便使一定的電流通過,而且要求具備不同pH值的載體有相同的電導系數,使整個體系中的電導均勻,如果有局部電導過小,就會產生極大的電位降,從而其他部分電壓就會太小,以致不能保持梯度,也不能使應聚焦的成分進行電遷移,達到聚焦。
5.分子量要小,便于與被分離的高分子物質用透析或凝膠過濾法分開。
6.化學組成應不同于被分離物質,不干擾測定。
7.無毒、無生物學效應。載體兩性電解質對哺乳動物的組織培養,酶活性測定,免疫檢測或注射到小白鼠或大鼠中都沒有影響。
8.應不與分離物質反應或使之變性。總起來說,當一個兩性電解質的等電點介于兩個很近的pk值之間時,它在等電點的解離度大,緩沖能力強,而且電導系數高,這 就是好的載體兩性電解質。
載體兩性電解質是一些具有相近等電點的分子量為600-900Da的多氨基多羥基兩性化合物的混合物,下面時配置不同pH范圍等電聚焦凝膠的載體兩性電解質的配方:
pH范圍 | 載體兩性電解質pH范圍 | 凝膠中的百分比% |
3.5-10 | 3.5-10 | 2.4 |
4-6 |
3.5-10 4-6 |
0.4 2 |
6-9 |
3.5-10 6-8 7-9 |
0.4 1 1 |
9-11 |
3.5-10 9-11 |
0.4 2 |