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  • 發布時間:2020-08-10 17:37 原文鏈接: 糖化血清蛋白測定實驗

    實驗方法原理 血清葡萄糖能與白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基上發生非酶促糖化反應,形成高分子酮胺結構.此酮胺結構能在堿性溶液中與硝基四氮唑藍(NBT)發生還原反應,生成用甲胺,并以1-脫氧―1―嗎啉果糖(OMF)為標準參照物進行比色測定,本實驗來源于牡丹江醫學院 本科 5 年制檢驗專業實驗指導

    實驗步驟

    一、實驗試劑:


    1、0.1mmol/L碳酸鹽緩沖液,PH10.8:無水碳酸鈉9.54g,碳酸氫鈉0.84g,    溶于蒸餾水并稀釋至1000ml。


    2、0.11mol/L  NBT試劑:稱取氯化硝基氮唑藍100mg,用于上述緩沖液溶解并稀釋至1000mL.置冰箱保存,至少可穩定3個月;


    3、4mmol/L DMF標準液:稱取DMF99.6g,熔于40g/L牛血清白蛋白溶液100ml中.


    二、實驗操作:


    測定管加待檢血清(血漿)0.1ml,空白管加蒸餾水0.1ml,各加37℃預溫的NBT試劑4ml,混勻,置37℃水浴準確15min,立即取出,流水冷卻(低于25℃),冷卻后15分鐘內分光光度計波長550nm,10nm光徑比色杯以空白管調零,讀取測定管.從標準曲線查得結果,以果糖胺mmol/L報告。


    標準曲線制備:


    取4mmol/L  DMF標準液用牛血清蛋白溶液(40g/L)稀釋成1、2、3、4mmol/L,并以血清蛋白,40g/L與測定管同樣操作,讀取各濃度DMF相應的吸光度,以DMF濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標,制成標準曲線。濃度在4mmol/L以內與吸光度呈線性關系.


    參考值:1.9十0.25mmol/L

      

    注意事項

    1、PH值、反應溫度,反應時間對本實驗影響較大,必須嚴格控制.


    2、血清蛋白經非酶促糖化反應可形成酮胺結構。DMF在適當的PH值及溫度條件下,經過結構重排可由氧環式結構形成1-脫氧-氨基-2-酮基的酮胺結構,因此用它作為標準參照物是合理的.以mmol/L報告結果較為理想.


    3、固定值凍于精化血紅蛋白做標準,測定結果更穩定,因為不同的標準物時所測得結果不完全一致,最好建立實驗室的參考值。


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