分析磷酸化蛋白的新方法

　　蛋白磷酸化是重要的翻譯后修飾，在調控基因表達和細胞功能方面起著關鍵作用。檢測磷酸化時一般使用磷酸化抗體。近幾年，市場上也出現了一些新的技術和產品，可實現磷酸化的靈敏檢測。

　　Phos-tag?便是其中的一種。它最初由日本廣島大學醫藥分子功能科學研究室開發，后由Wako公司商業化。Phos-tag?是一種能與磷酸離子特異性結合的功能性分子。在中性pH(生理性pH)條件下，它可與陰離子取代基結合，特別是與二價的磷酸單酯陰離子結合。

　　Phos-tag?的基本結構

　　Phos-tag?技術便利用了這一特點，取代傳統的酶免疫法和放射性同位素法，用來捕捉帶有陰性取代基，特別是二價磷酸單酯陰離子的物質，改善了以往磷酸化檢測結果不是特別穩定的缺點，是迄今為止檢測磷酸化合物比較穩定的技術。

　　目前，Phos-tag?產品主要分為四大類，可用于磷酸化蛋白的分離(Phos-tag? Acrylamide)、Western Blot檢測(Phos-tag? Biotin)、蛋白純化(Phos-tag? Agarose)及質譜分析MALDI-TOF/MS(Phos-tag? Mass Analytical Kit)。

　　磷酸化蛋白的檢測

　　Phos-tag? Biotin是與生物素結合的Phos-tag?，可代替western blot檢測中的磷酸化抗體。Phos-tag? Biotin BTL-104和BTL-105可靈敏檢測PVDF膜上的磷酸化蛋白。現推出液體型。

　　特點：

　　? 無輻射

　　? 無需PVDF膜的封閉處理

　　? Phos-tag?的特異性結合與氨基酸種類、序列無關

　　? 可適用于免疫印跡和質譜分析等后續工作

　　? Phos-tag?-BTL母液可穩定保存至少6個月

　　? 實驗流程與使用HRP標記抗體相類似

　　磷酸化蛋白的分離

　　Phos-tag? Agarose為分離、濃縮天然磷酸化的蛋白和生物樣品(生理條件下)中磷酸化多肽提供一種高效的方法。

　　特點：

　　? 緩沖液不含有還原劑和去污劑

　　? 與親和層析方法類似

　　? 可在1小時內純化磷酸化蛋白

　　? Phos-tag? Agarose捕獲結合到Tyr、Thr、Ser、Asp、His等氨基酸、糖類、脂類上的無機磷酸根和大量二價磷酸根