細胞轉染是指將外源基因如DNA,RNA等導入細胞內的一種技術。根據哺乳動物細胞蛋白表達流程,細胞培養完成后需進行細胞轉染,根據不同的實驗目的可選擇不同的轉染方法。目前,常用的細胞轉染方法主要分為三類途徑:物理介導(電穿孔法,基因槍法、顯微注射法)、化學介導(脂質體轉染法、磷酸鈣共沉淀法、陽離子聚合物介導法)、生物介導(病毒介導轉染、原生質體轉染)。
細胞轉染方法 | 細胞轉染原理 | 主要特點 | 適用類型 |
陽離子脂質體轉染法 | 帶正電荷的脂質體靠靜電作用和DNA 結合形成 DNA-脂質體復合物,然后通過細胞的內吞作用進入細胞 | ·操作簡便 ·適用于各種裸露的DNA和RNA片段 ·適合轉染各種細胞 ·對DNA濃度有一定要求 ·重復性好,但轉染時需除血清 |
瞬時轉染 穩定轉染 所有細胞 |
DEAE-右旋糖苷法 | 帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸的磷酸基團形成帶正電的復合物,復合物和帶負電的細胞膜接觸后而被細胞膜攝取 | ·有一定的毒性 ·操作簡單,適用性廣 ·重復性好,但轉染時需除血清 |
瞬時轉染 |
磷酸鈣法 | 磷酸鈣能夠促進外源DNA和細胞的結合,磷酸鈣-DNA復合物能夠附著到細胞表面,并通過內吞作用進入細胞 | ·操作簡單 ·對DNA濃度要求高 ·適用性有局限(不適用于原代細胞) |
瞬時轉染 穩定轉染 |
電穿孔法 | 高脈沖的電壓破壞細胞膜,在細胞膜表面形成孔道,DNA通過孔道進入細胞 | ·適用性廣,適用于質粒和幾十kb的基因組片段 ·針對不同細胞要優化實驗條件細胞 ·致死率較高 |
瞬時轉染 穩定轉染 所有細胞 |
顯微注射法 | 利用顯微操作系統和顯微注射技術將 DNA直接注入到細胞中 |
·整合率較高,適用于工程改造和轉基因動物的建立 ·操作復雜,且需要昂貴精密的設備 ·外源基因的整合位點和拷貝數無法控制,會導致片段缺失、突變 |
瞬時轉染 穩定轉染 |
逆轉錄病毒轉染 | 通過病毒的膜蛋白和細胞表面的受體相互作用而進入細胞,利用宿主細胞酶自行轉錄復制合成DNA,并隨機整合到細胞基因組中 | ·轉染效率高,適用于難轉染細胞轉染利用病毒介導轉染,外源基因整合較穩定 ·逆轉錄病毒只選擇感染分裂細胞 ·容納外源基因長度<8kb |
瞬時轉染 穩定轉染 特定細胞 |
隨著分子生物學的發展,轉染已經成為研究和控制細胞基因功能、實現基因調控的常規工具。理想的基因轉染試劑應該具有如下特點:高效轉染;安全;低細胞毒性;方法簡單;省時、經濟。
作為NCBI推薦的基因克隆供應商,GeneCopoeia推出5款不同類型的轉染試劑:
※ EndoFectin? Max(基于脂質體轉染原理的轉染試劑)
產品特性
對比Lipofectamine? 2000,EndoFectin? Max在多種哺乳動物細胞中具有更優良的轉染效率,適用于多種細胞系的轉染操作;
對比Lipofectamine? 3000,EndoFectin? Max具有同等或更高的轉染效率;
對比Lipofectamine? 2000,EndoFectin? Max對siRNA和質粒均有更優良的轉染效率;
細胞毒性低;
進行轉染操作時,不需提前去除細胞培養液或血清;
進行轉染操作后,不需清洗細胞或更換培養基;
適用于基因過表達、基因敲減、敲除的常規轉染操作,亦適用于微孔板的高通量轉染操作。
貨號 | 名稱 | 適用性 |
EF003 | EndoFectin? Max轉染試劑 (1 mL) | 廣泛適用于多種細胞 |
EF004 | EndoFectin? Max轉染試劑 (3 mL) |
※ CRISPR-Fectin?(CRISPR-Cas9核蛋白專用的轉染試劑)
產品特性
專門用于Cas9蛋白和合成的sgRNA的轉染實驗;
與其它公司的同類型產品相比,具有更高的轉染效率;
轉染前無需提前去除細胞培養液或血清;
轉染后無需更換培養基。
貨號 | 名稱 | 適用性 |
EF015 | CRISPR-Fectin? 轉染試劑 (1 mL) | 優化的CRISPR-Cas9核蛋白專用的轉染試劑。可與GeneHero? Cas9蛋白配合使用 |
EF016 | CRISPR-Fectin? 轉染試劑 (3 mL) |
※ EndoFectin? Expi293(為Expi293F懸浮細胞進行優化設計)
產品特性
特別為Expi293F懸浮細胞進行優化設計,配合Expi293F懸浮細胞使用,可提高實驗效率;
與其它公司的同類型產品相比,在Expi293F懸浮細胞的轉染效率更高;
進行轉染操作時,不需提前去除細胞培養液或血清;
進行轉染操作后,不需清洗細胞或更換培養基;
適用于基因過表達、基因敲減、敲除的常規轉染操作,亦適用于微孔板的高通量轉染操作
貨號 | 名稱 | 適用性 |
EF007 | EndoFectin? Expi293 轉染試劑 (1 mL) | 專注轉染懸浮細胞293F,轉染效率極高 |
EF009 | EndoFectin? Expi293 增強轉染試劑盒 (1L 轉染用量) | |
EF010 | EndoFectin? Expi293 增強轉染試劑盒 (10L 轉染用量) |
※ EndoFectin? HepG2(特別為常用細胞系HepG2進行優化設計)
產品特性
特別為常用細胞系HepG2進行優化設計,HepG2是一種通常情況下較難轉染的細胞;
與Lipofectamine? 2000、Lipofectamine? 3000相比,對HepG2細胞有更高的轉染效率;
在HepG2細胞的轉染效果可與電轉染方法媲美,方便您以更簡便快捷的方式獲得高轉染效率;
對比Lipofectamine? 2000,對siRNA和質粒都有更高的轉染效率;
進行轉染操作時,不需提前去除細胞培養液或血清;
進行轉染操作后,不需清洗細胞或更換培養基。
貨號 | 名稱 | 適用性 |
EF005 | EndoFectin? HepG2 轉染試劑 (1 mL) | 為常用細胞系HepG2進行優化設計 |
EF006 | EndoFectin? HepG2 轉染試劑 (3 mL) |
※ EndoFectin? Lenti(一種基于陽離子轉染原理的、高效的轉染試劑)
產品特性
轉染293T細胞,可收獲更高滴度的慢病毒
對比市場其它同類型產品,EndoFectin? Lenti可為慢病毒包裝操作帶來更高的轉染效率和更高的產物滴度(如下圖)
貨號 | 名稱 | 適用性 |
EF001 | EndoFectin? Lenti轉染試劑 (1 ml) | 轉染293T細胞,可收獲更高滴度的慢病毒 |
EF002 | EndoFectin? Lenti轉染試劑 (3 ml)) |