蒽酮法測定可溶性糖

【原理】

糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛或羥甲基糠醛,生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內,顏色深淺與糖含量成正比，故可用于糖的定量。

該法的特點是幾乎可測定所有的碳水化合物，不但可測定戊糖與已糖，且可測所有寡糖類和多糖類，包括淀粉、纖維素等（因為反應液中的濃硫酸可把多糖水解成單糖而發生反應），所以用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。

在沒有必要細致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應用價值，但在測定水溶性碳水化合物時，則應注意切勿將樣品的末溶解殘渣加入反應液中，不然會因為細胞壁中的纖維、半纖維素等與蒽酮試劑發生反應而增加了測定誤差。

此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺，故測定糖的混合物時，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時則可避免此種誤差。

糖類與蒽酮反應生成的有色物質在可見光區的吸收峰為630nm，故在此波長下進行比色。

【儀器與用具】

同方法一。

【試劑】

1．蒽酮乙酸乙酯試劑：取分析純蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，貯于棕色瓶中，在黑暗中可保存數星期，如有結晶析出，可微熱溶解。

2．濃硫酸（比重1.84）。

【方法】

1．標準曲線的制作

按方法一標準曲線的制作方法加入標準的蔗糖溶液，然后按順序向試管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯試劑和5ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管均準確保溫1min，取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在630nm波長下測其光密度，以光密度為縱坐標，以糖含量為橫坐標，繪制標準曲線，并求出標準線性方程。

2．可溶性糖的提取同方法一第二步。

3．顯色測定 吸取樣品提取液0.5ml于20ml刻度試管中（重復2次），加蒸餾水1.5ml，以下步驟與標準曲線測定相同，測定樣品的光密度。

4．計算可溶性糖的含量，計算公式同方法一。