光譜分析（分光光度技術）

　利用各種化學物質所具有的發射、吸收或散射光譜譜系的特征，來確定其性質、結構或含量的技術，稱為光譜分析技術。

　　分類：光譜分析技術分為發射光譜分析（熒光分析法和火焰光度法）、吸收光譜分析（可見及紫外光分光光度法、原子吸收分光光度法）和散射光譜分析（比濁法）。

　　（一）可見及紫外分光光度法

　　1.Beer定律：A=k·b·c

　　k一吸光系數

　　b一光徑，單位：cm.

　　c一溶液濃度，單位：g／L

　　2.摩爾吸光系數：在公式“A=k·b·c”中，當c=1mol／L，b=1cm時，則常數k可用ε表示。

　　3.比吸光系數：在公式“A=k·b·c”中，當c為百分濃度（w／v），b為cm時，則常數k可用E%表示，稱為比吸光系數或百分吸光系數。

　　（二）原子吸收分光光度法

　　原子吸收分光光度法是基于元素所產生的原子蒸氣中待測元素的基態原子，對所發射的特征譜線的吸收作用進行定量分析的一種技術，常用的定量方法有：

　　1.標準曲線法：將一系列濃度不同的標準溶液按照一定操作過程分別進行測定，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。在相同條件下處理待測物質并測定其吸光度，即可從標準曲線上找出對應的濃度。由于影響因素較多，每次實驗都要重新制作標準曲線。

　　2.標準加入法：把待測樣本分成體積相同的若干份，分別加入不同量的標準品，然后測定各溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標，標準品加入量為橫坐標，繪制標準曲線，用直線外推法使工作曲線延長交橫軸，找出組分的對應濃度。本法的優點是能夠更好地消除樣品基質效應的影響。

　　3.內標法：在系列標準品和未知樣品中加入一定量樣本中不存在的元素（內標元素），分別進行測定。以標準品與內標元素的比值為縱坐標，標準品濃度為橫坐標繪制標準曲線，再根據未知樣品與內標元素的比值依曲線計算出未知樣品的濃度。本法要求內標元素應與待測元素有相近的物理和化學性質。只適用于雙通道型原子吸收分光光度計。

　　（三）熒光分析法

　　利用熒光強度進行分析的方法，稱為熒光法。在熒光分析中，待測物質分子成為激發態時所吸收的光稱為激發光，處于激發態的分子回到基態時所產生的熒光稱為發射光。熒光分析法測定的是受光激發后所發射的熒光強弱。

　　（四）火焰光度法

　　火焰光度法是利用火焰中激發態原子回降至基態時發射的光譜強度進行含量分析的方法。樣品中待測元素激發態原子的發射光強度I與該元素濃度C呈正比關系，即I=aC，式中a為常數，與樣品組成、蒸發和激發過程有關。

　　火焰光度法通常采用的定量方法有標準曲線法、標準加入法和內標法。

　　（五）透射和散射光譜分析法

　　主要測定光線通過溶液混懸顆粒后的光吸收或光散射程度，常用法為比濁法，又可稱為透射比濁法和散射比濁法。臨床上多用于對抗原或抗體的定量分析。