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  • 發布時間:2019-04-09 19:51 原文鏈接: 微生物的染色與形態結構觀察實驗——革蘭氏染色法

    實驗方法原理革蘭氏染色反應是細菌分類和鑒定的重要性狀。它是1884年由丹麥醫師Gram創立的。革蘭氏染色法(Gramstain)不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類:染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,用G+表示;染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌,用G-表示。細菌對于革蘭氏染色的不同反應,是由于它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由肽聚糖形成的網狀結構組成的,在染色過程中,當用乙醇處理時,由于脫水而引起網狀結構中的孔徑變小,通透性降低,使結晶紫-碘復合物被保留在細胞內而不易脫色,因此,呈現藍紫色;革蘭氏陰性細菌的細胞壁中肽聚糖含量低,而脂類物質含量高,當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁的通透性增加,使結晶紫-碘復合物易被乙醇抽出而脫色,然后又被染上了復染液(番紅)的顏色,因此呈現紅色。
    實驗材料

    大腸桿菌枯草芽孢桿菌

    試劑、試劑盒

    革蘭氏染色液

    儀器、耗材

    載玻片顯微鏡

    實驗步驟

    1.  涂片將培養14~16小時的枯草芽孢桿菌和培養24小時的大腸桿菌分別作涂片(注意涂片切不可過于濃厚),干燥、固定。固定時通過火焰1~2次即可,不可過熱,以載玻片不燙手為宜。


    2.  染色


    (1)初染加草酸銨結晶紫一滴,約一分鐘,水洗。


    (2)媒染滴加碘液沖去殘水,并覆蓋約一分鐘,水洗。


    (3)脫色將載玻片上面的水甩凈,并襯以白背景,用95%酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止,約20~30秒鐘,立即用水沖凈酒精。


    (4)復染用番紅液染1~2分鐘,水洗。


    (5)鏡檢干燥后,置油鏡觀察。革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準,過于密集的細菌,常常呈假陽性。


    (6)同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合制片,作革蘭氏染色對比。


    革蘭氏染色的關鍵在于嚴格掌握酒精脫色程度,如脫色過度,則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時,陰性菌可被誤染為陽性菌。此外,菌齡也影響染色結果,如陽性菌培養時間過長,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈陰性反應。


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