1. 涂片將培養14~16小時的枯草芽孢桿菌和培養24小時的大腸桿菌分別作涂片(注意涂片切不可過于濃厚),干燥、固定。固定時通過火焰1~2次即可,不可過熱,以載玻片不燙手為宜。 2. 染色
(1)初染加草酸銨結晶紫一滴,約一分鐘,水洗。
(2)媒染滴加碘液沖去殘水,并覆蓋約一分鐘,水洗。
(3)脫色將載玻片上面的水甩凈,并襯以白背景,用95%酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止,約20~30秒鐘,立即用水沖凈酒精。
(4)復染用番紅液染1~2分鐘,水洗。
(5)鏡檢干燥后,置油鏡觀察。革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準,過于密集的細菌,常常呈假陽性。
(6)同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合制片,作革蘭氏染色對比。
革蘭氏染色的關鍵在于嚴格掌握酒精脫色程度,如脫色過度,則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時,陰性菌可被誤染為陽性菌。此外,菌齡也影響染色結果,如陽性菌培養時間過長,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈陰性反應。 展 |