將成片細胞的生長液倒掉,用Hank's 液洗一次。
加入適量的0.1~0.25% 胰蛋白酶,37 ℃孵育1 分鐘。
將細胞倒放,細胞在上,胰酶在下,繼續孵育37 ℃5~10 分鐘。
將胰蛋白酶倒掉,再加入原量的生長液,用10 毫升吸管吹打分散細胞。
用生長液按原量3-4 倍稀釋,即一瓶細胞能傳3-4 瓶。
病毒接種及CPE 觀察:
①取已長成單層細胞的培養瓶二只,用無菌毛細滴管吸去管中液體。
②用無菌的1 毫升吸管吸稀釋的腺病毒液0.1 毫升加入一只單層細胞培養瓶中,另一只加0.1 毫升營養液不接種病毒作對照,細胞瓶平放,使其接觸整個細胞層,置37 ℃使作用15~30 分鐘。
③取出單層細胞瓶,每只瓶中加入營養液0.9 毫升,蓋緊后置37 ℃孵箱中培養1~2 天。
④取出細胞在低倍顯微鏡下觀察,注意有無出現CPE(細胞腫脹,變圓,集聚成葡萄串狀等)。 展開 |