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  • 發布時間:2019-04-09 19:44 原文鏈接: 病毒的培養方法實驗——傳代細胞培養法

    實驗方法原理從人及動物某些組織,特別是腫瘤組織,經多次傳代可建立傳代細胞系,這種細胞能無限地傳代,某些傳代細胞對病毒敏感范圍較廣,可用作病毒的分離鑒定,如HeLa 細胞,Hep-2 細胞及KB 細胞。

    三種細胞均來自人腫瘤組織細胞,HeLa 細胞來自子宮頸癌,Hep-2 細胞來自喉癌而KB 細胞來自上顎癌。由于這幾種傳代細胞有致腫瘤作用,目前僅用做病毒的分離鑒定及一些病毒學研究,不能用于疫苗的生產。
    實驗步驟

    將成片細胞的生長液倒掉,用Hank's 液洗一次。

    加入適量的0.1~0.25% 胰蛋白酶,37 ℃孵育1 分鐘。

    將細胞倒放,細胞在上,胰酶在下,繼續孵育37 ℃5~10 分鐘。

    將胰蛋白酶倒掉,再加入原量的生長液,用10 毫升吸管吹打分散細胞。

    用生長液按原量3-4 倍稀釋,即一瓶細胞能傳3-4 瓶。

    病毒接種及CPE 觀察:

    ①取已長成單層細胞的培養瓶二只,用無菌毛細滴管吸去管中液體。


    ②用無菌的1 毫升吸管吸稀釋的腺病毒液0.1 毫升加入一只單層細胞培養瓶中,另一只加0.1 毫升營養液不接種病毒作對照,細胞瓶平放,使其接觸整個細胞層,置37 ℃使作用15~30 分鐘。

    ③取出單層細胞瓶,每只瓶中加入營養液0.9 毫升,蓋緊后置37 ℃孵箱中培養1~2 天。

    ④取出細胞在低倍顯微鏡下觀察,注意有無出現CPE(細胞腫脹,變圓,集聚成葡萄串狀等)。 

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