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  • 發布時間:2019-04-08 14:38 原文鏈接: 放線菌形態觀察實驗——扦片法

    放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的—類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體,緊貼培養基表面或深入培養基內生長的叫基內菌絲(簡稱“基絲”),基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲(簡稱“氣絲”)并進一步分化產生孢子絲及孢子,有的放線菌只產生基絲而無氣絲。在顯微鏡下直接觀察時,氣絲在上層、基絲在下層,氣絲色暗,基絲較透明。孢子絲依種類的不同,有直、波曲、各種螺旋形或輪生。在油鏡下觀察,放線菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。能否產生菌絲體及由菌絲體分化產生的各種形態特征是放線菌分類鑒定的重要依據為了觀察放線菌的形態特征,人們設計了各種培養和觀察方法,這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長狀態下的形態特征,本實驗介紹其中幾種常用方法。

    實驗方法原理

    將放線菌接種在瓊脂平板上,扦上滅菌蓋玻片后培養,使放線菌菌絲沿著培養基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上匾觀察時,輕輕取出蓋玻片。置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態下的特征,而且便于觀察不同生長期的形態。

    實驗材料

    細黃鏈霉菌/青色鏈霉菌/弗氏鏈霉菌

    儀器、耗材

    滅菌的高氏1號瓊脂平皿蓋玻片載玻片接種環鑷子顯微鏡

    實驗步驟

    1. 倒平板

    取融化并冷至大約 50 ℃ 的高氏 1 號瓊脂約 20 ml 倒平板,凝固待用。


    2. 接種

    用接種環挑取菌種斜面培養物(孢子)在瓊脂平板上劃線接種。劃線要密些,以利扦片。


    3. 扦片

    以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約 45° 角扦入瓊脂內(扦在接種線上)(圖 IV-7),扦片數量可根據需要而定。


    4. 培養

    將扦片平板倒置, 28 ℃ 培養,培養時間根據觀察的目的而定,通常 3~5 d。


    5. 鏡檢

    用鑷子小心拔出蓋玻片,擦去背面培養物,然后將有菌的一面朝上放在載玻片上,直接鏡檢。

    展開 
    注意事項

    觀察時宜用略暗光線:先用低倍鏡找到適當視野。再換高倍鏡觀察。如果用 0.1% 美藍對培養后的蓋玻片進行染色后觀察,效果會更好。


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