流式細胞儀檢測細胞因子的分泌和分離分泌細胞因子細胞

基本方案細胞因子分泌實驗

材 料

冰冷的或 37°C 預溫的培養液。例如，培養人細胞用含 1 0 % 人 A B 血漿或自身血清的 1640 完全培養液。培養小鼠細胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培養基

抗原， 1?10ug/m l 肽 或 1?100ug/m l 蛋白質

合適的對照抗原

金黃色葡萄球菌腸毒素（S E B ， Sigma)

P B S ， p H 7. 2 , 含 0.5% (m /V ) B S A 和 2 mmo l /L E D T A ，冰上預冷

細胞因子捕獲試劑：一抗，包含抗細胞表面抗原的抗體（如 C D 4 5 ) 和抗細胞因子抗 體（Miltenyi Biotec 公司）

重組的細胞因子

細胞因子檢測抗體（Miltenyi Biotec 公司）： P E 、 A P C (allophycocyanin) 或 FITC標記的抗細胞因子單抗

熒光素標記的抗體：抗 人 或 小 鼠 C D 4-F I T C ，抗 人 C D M -PerCP，抗 小 鼠 C D 45R /B 220- PerCP 等

抗 P E 磁 珠（Miltenyi Biotec 公司）

9 6 孔 或 2 4 孔培養板或 6c m 培養皿

細胞刮或類似工具

1.5?15 ml V 形底管或深孔培養板

慢速旋轉培養器

1 . 制備 人 P B M C (單元 8 . 1 ) 或小鼠脾臟/淋 巴 結 細 胞（單 元 2.1)。計數細胞和測定細胞 活 性

在 細 胞 分 離 、刺 激 和 凍 存 時 不 要 使 用 任 何 非 人（人 細 胞） 或 非 小 鼠（小 鼠 細 胞 ）

備 選 方 案 I PBMC 分泌細胞因子的快速檢測

1 . 制 備 和 洗 滌 細 胞（見基本方案，步 驟 1 和 2)。 用培養液懸浮細胞 ： I X l O⁷ 個細胞/m l

2 . 每個 1.5 ml V 形底管或深孔培養板中加入IOOul含IX IO⁶ 個細胞的細胞懸液。標記為 A

3 . 按基本方案步驟 4 加入抗原和賻育細胞

備 選 方 案 2 全血細胞分泌細胞因子的快速檢測

附 加 材 料