磁珠法核酸提取過程中的6種常見誤區

使用生物磁珠提取核酸，在國內還屬于較為新穎的核酸提取方式，相比于傳統的異戊醇抽提法和離心柱試劑盒法，這種方法還有很多人不慎了解，在使用磁珠法提純核酸的過程中，也存在著一些誤區。

誤區一：磁珠使用的越多，提取效果越好

有很多老師喜歡在提取效果不佳的時候，增加磁珠的用量，認為磁珠多加一點，就能吸上更多的核酸，不得不說這種想法是不可取的。

磁珠的主要特點是既可以分散于液體中，也可以在外加磁場作用下以固態方式和液相分離，任何試劑體系，磁珠和液體的比例都應該是有一定閾值的，超過一定的比例，過多的磁珠將因為無法均勻分散于液體中，而喪失其分散的特性，也使得洗滌過程中無法充分增加核酸磁珠和液體接觸的效率。而過量的磁珠也會吸附更多的雜質，對于除雜的效果影響非常大。甚至有些時候，過多的磁珠會吸附蛋白酶、溶菌酶等在液體體系中起主要作用的功能成分，導致整個試劑盒效率低下。有很多時候，在提取效果不佳的時候，減少磁珠使用量，反而是提升提取效果的zui優途徑。

通常情況下，磁珠法試劑盒給出的參考磁珠用量都是略微過量的，因此需要增加磁珠用量改善吸附效率的情況并不多，但如果確定是磁珠用量不足導致的提取效果不好，是可以在一定范圍內通過增加磁珠用量來改善提取效果的。

以GNT-02系列磁珠為例，在提取常量樣本（植物組織，全血等）時，通常用量為10ul/次；在提取微量樣本（如血清游離DNA，口腔拭子等）時，磁珠用量為15~20ul/次。如需超過這個使用量，需要和技術工程師進行溝通。

誤區二：試劑使用的越多，提取效果越好

裂解效果不好？多加點裂解液。洗滌效果不好？多加點洗滌液。這是很多客戶在使用試劑盒中的慣性思維。

但是對于磁珠法而言，每增加一部分液體體積，就減少了更多的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會導致吸附率的大幅度下降。所以很多時候，雖然增加裂解液和洗滌液確實能夠起到增強裂解和增強洗滌的作用，但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，無法保證磁珠碰撞效率是不能保證核酸提取效率的，所以單純增加試劑使用量改善提取效果并不一定完全有效。

對于GNT-B02全血基因組DNA試劑盒而言，一般裂解液使用量不應超過400ul/次，洗滌液使用量不應超過500ul/次。如果確實需要放大體系，磁珠和樣本用量也應該相應增加，這種放大不一定是等比例的。

誤區三：洗滌次數越多，提取效果越好

提取得到的核酸雜質過多時，使用者會考慮多進行幾次洗滌，以得到更為純凈的核酸。增加洗滌次數確實有利于提純核酸，但考慮到每次洗滌都會損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂水解的可能性，所以一般來說洗滌次數控制在2~4次為宜。

GNT系列的試劑盒，單一純化類試劑盒的洗滌次數為2次，植物、動物類試劑盒的洗滌次數為3次，血液類試劑盒洗滌次數為3~4次。

誤區四：樣本取用的越多，提取效果越好

在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身就很少的情況下，往往核酸提取效果不好，很多老師就會采用多取樣本的方式增加核酸提取量。

但簡單地增加樣本取樣量，有時會引入過多的雜質，超出裂解液裂解能力，也會使提取效率降低，所以并不推薦通過簡單的增加樣本取樣量的方式來達到增加提取量的目的。

如果確實是由于樣本量不足而引起的提取量過低，建議在前處理先經過富集或者濃縮步驟再開始提取。或者增加裂解的完全性，使更多的核酸暴露出來也是一種解決方法。

誤區五：某一種磁珠好，就應該在所有試驗中效果都好

磁珠的種類是多種多樣的，粒徑大小不同，分散性不同，磁響應時間不同，包被基礎基質不同，外層修飾官能團不同，包被密度不同，官能團臂長不同，會導致磁珠特性千差萬別。

所以不同磁珠所適應的實驗和體系也是不同的。就像同樣是核酸提取的試劑，配方也并不完全相同，同樣應用于核酸提取的磁珠，性質也并非完全一致。

有的磁珠在常量核酸提取中表現出了更高的吸附效率，有的磁珠更適用于微量核酸提取。有的磁珠適合偏酸性系列的試劑體系，有的磁珠適合偏堿性系列的試劑體系。有的磁珠磁響應性好但是沉降速度快，更適合磁棒式自動提取儀；有的磁珠沉降速度慢但是磁響應時間長，更適合移液式自動提取儀。

很少有一種磁珠能適用于所有實驗的情況，除了固定的試劑盒配合，多數情況下，磁珠和試劑體系都要做一定時間的配合調整。

誤區六：和某種試劑盒對比效果不好，就是磁珠不好

很多客戶在篩選磁珠過程中都是在已經成熟試劑體系下，簡單地等量替換磁珠，用于比較磁珠效果。

這樣就會很容易得出某種磁珠效果不好的結論，但實際上，由于不同磁珠適合的體系和用量是不同的，往往需要調整過后才能獲得更好的提取效果。