自動生化分析儀參數設置

了解生化分析儀基本參數的原理，有利于儀器、試劑的正確使用，有助于正確分析和處理測定數據。生化分析儀根據自動化程度分半自動和全自動，從目前試劑盒供應情況來看，主要的測定方法為：終點法(包括一點終點法和兩點終點法)、速率法(連續檢測法)、速率兩點法(兩點法)，后兩種統稱動力學法。

方法類型可根據試劑盒要求或反應原理來設置。對于半自動生化分析儀終點法只是一點終點法，全自動生化儀單試劑選擇一點終點法，而雙試劑選擇兩點終點法。大多數酶學測定使用速率法，尿素氮、肌酐測定等用兩點法。

1、一點法

又稱為終點法。指加入標本和試劑后，當反應達到一定階段時（或終點）測定吸光度值計算待測物質濃度的方法。主要用于總蛋白、白蛋白、血糖、甘油三酯和膽固醇等項目測定。

2、二點法

在反應過程中測定兩個時間點的吸光度（A1、A2），利用二者的差值（A1-A2）計算待測物質濃度的方法。二點法又稱為二點終點法，使用雙試劑進行分析時多彩二點法，加入標本和第一試劑測定一次吸光度，加入第二試劑（啟動試劑）待反應完成時測定另一個吸光度，兩者的差值可消除標本內源性物質的干擾。主要用于總膽紅素、直接膽紅素、甘油三酯和膽固醇等項目的測定。

3、二點速率法

在反應過程中選擇適當兩點測定其吸光度，計算出單位時間（常為分鐘）內吸光度的變化量，通過吸光度的變化量計算待測物質濃度的方法。二點速率分析法主要用于Jaffe法測定肌酐。

4、速率A法

根據酶促反應的特點，當底物濃度足夠大，當酶促反應達到最大時，單位時間內底物的消耗量和產量的生成量維持不變，即單位時間內吸光度變化值不變，在酶促反應的零級反應區內選取兩個時間點，計算出每分鐘吸光度變化，吸光度變化值同酶活性大小成正比。速率A法常用于酶活性的測定。

以上各種分析法可同時選用雙波長法。雙波長法指在測定時選擇主波長和副波長，主波長用于待測物質的測定，而副波長用于消除可能產生的干擾。副波長選擇原則為干擾物質在主波長和副波長的光吸收相等，而等測物質有最小的吸光度，兩波長不能相隔太近。

主要是針對流動比色的全自動或半自動儀器的參數，原則是吸人量不得大于或等于反應液總體積，否則會導致吸空形成比色池氣泡，最好留100～200ul的余地。

酶促反應延遲期后，在過量底物的存在下，反應速率加快并達到一個反應速率穩定的階段，即酶促反應以恒定的速率進行，不受底物濃度的影響，這段時間稱為線性反應期或零級反應期，自動化生化分析儀的監測時間即為此期。測酶的連續監測法至少90—120s或至少4點(3個AA)，少于3個△A不能稱為連續監測法，因為不能計算線性度。監測時間過長則容易發生底物耗盡，可測范圍變窄。

一點法和兩點法必須設置標準，選擇合格的標準品很重要。有些試劑盒配有標準液，但是部分項目標準液定標偏差太大，校準液復溶后分裝冷凍保存，只要復溶的水質保證，避免反復凍融，校準的結果還是很滿意的。注意校準液靶值獲得的方法學，方法不同耙值是有差異的，比較典型的是ALP測定有IFCC和DGKC法，差異比較大，不可簡單套用。2．9 K值速率法測定無需帶標準或做標準曲線，首先確定樣本量和工作試劑量，再根據被測物質的摩爾消光系數，就可按速率法計算公式計算出因素K值了。K=TV×10。／(8×SVXL)，TV為反應液總體積，sV為樣本體積，L為比色杯光徑(em)，￡為毫摩爾消光系數。

有的生化儀要求設置試劑吸光度上下限，主要是用來監測試劑的質量的，但是試劑吸光度上限和下限不是試劑質量的唯一指針。因此，一定的校準頻率和室內質控是質量保證的必需手段。我們在實際工作中就遇到酶活力測定的試劑空白數據在規定限值內，但質控物測定結果連續偏低，病人結果因每天標本少而難以判斷，最后發現是試劑質量下降。

試劑盒的線性范圍與試劑質量、反應時試劑樣品比有關，應實測試劑盒的線性范圍。當樣品濃度低于線性下限應增加樣品量重測，而高于線性上限則應稀釋后重測。使用任何一種方法測定某待測物時，待測物都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結果若超過此范圍，儀器將顯示測定結果超過線性范圍的提示，多數分析儀會自動將樣品減量或增量重新測定。

自動生化分析儀的參數設置，包括分析方法、波長、吸樣量、檢測時間、標準液濃度、試劑吸光度上下限以及線性范圍，缺一不可，不同儀器的參數設置可能有所差異，本文就貝克曼DXC系列的設置做下簡易的說明。