關于復制型基因的克隆介紹
將目的基因仍保留在染色體以外的克隆系統稱為復制型基因克隆系統，以區別整合到染色體上的整合型克隆系統。盡管有大量不同的噬菌體，但所有已知的乳球菌復制型克隆系統都是由質粒構建的。 乳球菌遺傳學研究證明，乳球菌含有數量不等的質粒，多則十幾個。它們當中一些編碼重要的代謝物質，為了分析和克隆這些基因，以及了解它們的命運，應當消除其內源性質粒。盡管有大量的質粒存在于乳球菌中，但許多質粒是隱蔽性的，這就推遲了內源性質粒在載體構建中的應用，同時由于一些相關的革蘭氏陽性菌發展的載體也可在乳球菌中復制，并表達它們的抗性標記。因此，有兩種本質不同的載體可以成功的用于乳球菌，它們分別用外源性的復制子和遺傳背景清楚的乳球菌復制子構成。......閱讀全文
不需要RNA中間物的復制型轉座介紹
在不需要RNA中間物的復制型轉座過程中，轉座子一般由Y2一轉座酶催化進行滾環復制。使用此途徑進行復制的轉座子有IS91和Helitron，轉座過程一般有兩種機制。一種機制的復制和插入分開進行，具體步驟如下： ①轉座酶切開轉座子起點處的一條鏈，酶的Tyr—OH與切口的5‘—磷酸基以酯鍵連接，切口
關于DNA復制過程的岡崎片段與半不連續復制的介紹
因為DNA的兩條鏈是反向平行的，所以在復制叉附近解開的DNA鏈，一條為5’—〉3’方向，另一條為3’—〉5’方向，兩個模板極性是不同。所有已知DNA聚合酶合成方向均為5’—〉3’方向，不為3’—〉5’方向，所以無法解釋DNA的兩條鏈同時進行復制的問題。解釋DNA兩條鏈各自模板合成子鏈等速復制現象
復制型分子結構的特點
復制型指某種核酸處于復制狀態的各種分子結構。更多地用于指RNA或單股DNA病毒復制期間形成的雙螺旋中間體。與之相聯系的主要有復制型DNA，復制型基因克隆，復制型轉座等過程，而復制型轉座又可分為兩種，一種需要RNA作為中間產物，一類不需要RNA作為中間產物。
關于DNA滾環復制的基本介紹
滾環式復制（rolling circle replication）是噬菌體中常見的DNA復制方式。許多病毒DNA的復制、質粒、F因子在接合（conjugation）轉移時其DNA的復制，以及許多基因擴增時都采用這種方式。 在以這種機制進行的復制中，親代雙鏈DNA的一條鏈在DNA復制起點處被切開
關于復制叉的基本信息介紹
DNA復制過程中，非復制區保持著親代雙鏈結構，復制區的雙螺旋分開，從此處形成兩個子代雙鏈，這兩個相接區域稱為復制叉，此處雙螺旋的結構被破壞。復制就是復制叉沿著親代DNA鏈移動，因此存在親代雙鏈的連續變性及子代雙螺旋的重新形成過程。 復制叉從位于復制起始點的起點開始沿著DNA鏈有序移動。起始點可
關于半不連續復制的特點介紹
（一）復制叉由5’向3’方向連續復制，稱為前導鏈；另一條鏈復制叉由3’向5’移動，而DNA復制方向不變，形成許多不連續片段，稱為岡崎片段，最后連接成完整的DNA，稱為滯后鏈。 （二）首先由引物合成酶由5’向3’方向合成10個核苷酸以內的RNA引物，然后聚合酶III在引物3’-羥基上合成DNA，
關于DNA滾環復制的過程介紹
環狀DNA可以采取上述典型的DNA復制方式進行復制，即從復制起點開始，雙向同時進行，形成θ樣中間物，故又稱"θ"型復制，最后兩個復制方向相遇而終止復制。但有些環狀DNA采用另個一種方式，即滾環復制。例如許多病毒DNA的復制、F因子在接合（conjugation）轉移時其DNA的復制，以及許多基因
關于復制子疫苗的基本介紹
委內瑞拉馬腦炎病毒（Venezue－ lan equine encephalitis virus, VEEV） 復制子表達 EBOV糖蛋白（GP）或核蛋白（NP）后，被用于埃博拉疫苗的研究。 單獨免疫表達NP的VEEV復制子可對小鼠提供完 全保護，單獨免疫表達 GP 的 VEEV 復制子可對豚
關于半不連續復制的綜述介紹
問題的提出 DNA兩條鏈反向平行，一條鏈走向為5‘→3‘，另一條鏈也為5‘→3‘，但與復制叉移動方向相反，但所有DNA聚合酶合成方向都是在引物3‘-OH上合成，使鏈從5‘→3‘延長，那么5‘→3‘鏈是如何同時作為模板復制呢？ 1968年岡崎提出DNA不連續復制模型（P418圖34-18），認
關于半不連續復制的模型介紹
1978年Olivera提出了半不連續（semidiscontinuous）復制模型，也就是說前導鏈上的合成是連續的，只有后滯鏈上的合成才是半連續的。 已經弄清原來是由于細胞內都存在有dTTP和dUTP，而DNApolⅢ卻并不能區分它們，因此也會將dUTP加入到DNA中，形成A·U對。那么在D
PCR技術目的基因的直接克隆介紹
與常規的基因克隆方法相比，PCR的優點是快速，簡單，但是用PCR克隆目的基因的限制是必須知道側接靶序列的核苷酸序列，以制備引物。因而該法具有很大的局限性。 可直接利用具有平端的PCR產物進行克隆，但利用合適的引物，在待克隆的目的基因二側引入不同的限制性酶切點，則可將擴增之后的目的基因定向克隆到
幾種基因克隆的常用方法介紹（二）
3.2 Differential display PCR(DD-PCR) DD-PCR是在AP-PCR基礎上發明的一種RT-PCR方法,主要用于 2種或多種類似生物個體在基因表達上的差異分析。其基本原理是:所有真核生物的成熟mRNA都含有不同長度的poly+(A)尾部序列,根據poly+ (
幾種基因克隆的常用方法介紹（一）
基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。1 根據已知序列克隆基因對已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最
什么是可復制型載體？
中文名稱可復制型載體英文名稱replication-competent vector定 義含有完整復制起始點序列的載體，能夠在一定條件下自行啟動復制。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
細胞化學詞匯DNAθ型復制
θ型復制是DNA在復制原點解開成單鏈狀態的復制，其分別作為模板，各自合成其互補鏈，出現兩個叉子狀的生長點，也叫做復制叉。
細胞化學詞匯復制型DNA
中文名稱：復制型DNA英文名稱：replicative form DNA;RF-DNA定 義：單鏈核酸(DNA或RNA)病毒在復制期間所形成的由親代單鏈分子與子代單鏈分子配對結合形成的DNA雙鏈。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
基因的圖位克隆
?圖位克隆(Ｍａｐ-ｂａｓｅｄｃｌｏｎｉｎｇ)又稱定位克隆(ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｃｌｏｎｉｎｇ),1986年首先由劍橋大學的Ａｌａｎｃｏｕｌｓｏｎ提出,用該方法分離基因是根據目的基因在染色體上的位置進行的,無需預先知道基因的ＤＮＡ順序,也無需預先知道其表達產物的有關信息,但應有以下兩方面的基本情況:
關于基因型疫苗的基本信息介紹
基因型疫苗指的是DNA疫苗，即將編碼外源性抗原的基因插入到含真核表達系統的質粒上，然后將質粒直接導入人或動物體內，讓其在宿主細胞中表達抗原蛋白，誘導機體產生免疫應答。凡具有抗原性接種于機體可產生特異的自動免疫力，可抵御感染病的發生或流行，總稱為疫苗。
基因型的介紹
基因型，是指某一生物個體全部基因組合的總稱。它反映生物體的遺傳構成，即從雙親獲得的全部基因的總和。遺傳學中具體使用的基因型，往往是指某一性狀的基因型。兩個生物只要有一個基因型不同，那么它們的基因型就不相同，因此基因型指的是一個個體所有等位基因的所有基因座上的所有組合。在雜交試驗中，專指所研究的、
關于腺病毒的轉錄與復制的介紹
一旦病毒基因組進入細胞核，就將進行一系列的復雜而有序的逐級放大的剪切和轉錄過程。一般的，以病毒DNA開始復制為分界線，按轉錄時間的先后，將腺病毒基因大致區分為早期（E1~4）和晚期轉錄單位（L1~5）。各種腺病毒基因又可以進一步地分為更小的轉錄單位，如E1區可以進一步分為E1A和E1B，每個轉錄
關于DNA的半不連續復制的介紹
在DNA復制過程中，雙螺旋被解開，互補鏈被解旋酶分離，形成了所謂的DNA復制叉。在這個分叉之后，DNA引物酶和DNA聚合酶開始起作用，合成一個新的互補鏈。因為這些酶只能從5 '到3 '的方向工作，這兩個解開的DNA模板鏈以不同的方式復制。其中，前導鏈的模板鏈具有5 '至3
關于多克隆抗體的基本介紹
抗原通常是由多個抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機體，由一個B淋巴細胞接受該抗原刺激所產生的抗體稱之為單克隆抗體（MonoclonalAntibody）。由多種抗原決定簇刺激機體，相應地就產生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機體內所產生的抗體就是多克隆抗體；除
關于細胞克隆的取材過程介紹
在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養器皿中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用于培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成
關于克隆實驗的過程相關介紹
先將含有遺傳物質的供體細胞的核移植到去除了細胞核的卵細胞中，利用微電流刺激等使兩者融合為一體，然后促使這一新細胞分裂繁殖發育成胚胎，當胚胎發育到一定程度后，再被植入動物子宮中使動物懷孕，便可產下與提供細胞者基因相同的動物。這一過程中如果對供體細胞進行基因改造，那么無性繁殖的動物后代基因就會發生相
關于分子克隆化的基本介紹
分子克隆技術是70年代才發展起來的，它的出現和應用開辟了分子遺傳學研究的新領域，打開了人類了解、識別、分離和改造基因，創造新物種的大門。它的成就對于工業、農牧業和醫學產生深遠影響，并將為解決世界面臨的能源、食品和環保三大危機開拓一條新的出路。
關于細胞克隆的所需環境介紹
1．無菌環境 無毒和無菌是體外培養細胞的首要條件。細胞在活體內，解毒系統和免疫系統可抵抗微生物或其他有害物質的入侵，但細胞在體外培養的過程中，缺乏機體免疫系統的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質的解毒能力。為保證細胞能在體外環境中生長繁殖，必須要確保無菌工作區域、良好的個人衛生、無菌試劑
需要RNA中間物的復制型轉座
逆轉錄轉座子都需要RNA中間物，但LTR逆轉錄轉座子和無LTR逆轉錄轉座子在轉座的具體步驟上有很大的差別。LTR逆轉錄轉座子進行轉座時，形成cDNA的過程與逆轉錄病毒合成cDNA相同，雙鏈cDNA通過剪切一黏接轉座插入靶序列。無LTR逆轉錄轉座子的轉座過程較復雜，以LINE為例，轉座的基本過程如下：
關于復制子的基本信息介紹
復制子（replicon）：是DNA復制時從一個DNA復制起點開始，最終由這個起點起始的復制叉完成的片段。DNA 中能獨立進行復制的單位稱為復制子。每個復制子使用一次，并且在每個細胞周期中只有一次。復制子中含有復制需要的控制元件。在復制的起始位點具有原點，在復制的終止位點具有終點。
關于半保留復制的其他方式介紹
DNA還可能存在其他兩種復制方式，都以原來親本DNA雙鏈分子作為模板鏈。 全保留復制（conservative replication）：保守復制會使兩條原始模板DNA鏈以雙螺旋結合在一起，并產生由兩條含有所有新DNA堿基對的新鏈組成的拷貝。 分散復制（dispersive replicat
關于半不連續復制的相關模型介紹
半保留復制（semiconservativereplication）：一種雙鏈脫氧核糖核酸（DNA）的復制模型，其中親代雙鏈分離后，每條單鏈均作為新鏈合成的模板。因此，復制完成時將有兩個子代DNA分子，每個分子的核苷酸序列均與親代分子相同，這是1953年沃森（J.D.Watson）和克里克（F.