哺乳動物精核的制備實驗
實驗材料哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）試劑、試劑盒PBS裂解緩沖液緩沖液 B儀器、耗材帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡實驗步驟1. 培養并收獲 3L 1×106 細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。2. 用 20 倍于沉淀體積（40 ml） 的裂解緩沖液重懸細胞沉淀，轉移到杜恩斯勻漿器中，用 B 型研磨棒研磨 15 次以裂解細胞。在顯微鏡下觀察裂解液。3. 4℃，3000 g 離心 15 min。4. 使用裂解緩沖液重復重懸及離心兩次，再用緩沖液 B 重復一次。在最后一次離心之前，將重懸液用 2 mol/L NaCl 稀釋 10～30 倍，測量 A260 值，估計核 DNA 的總量。5. 用 2 倍于沉淀體積的緩沖液 B 重懸得到的核，測量重懸液的總體積。6. 輕輕攪動，一滴一滴地加入 1 體積的緩沖液 B/0.6 mol/L KCl/10％......閱讀全文
哺乳動物精核的制備實驗
實驗材料哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）試劑、試劑盒PBS裂解緩沖液緩沖液 B儀器、耗材帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡實驗步驟1. 培養并收獲 3L 1×106?細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。2. 用 20 倍于沉淀體積（40
哺乳動物精核的制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）試劑、試劑盒 PBS裂解緩沖液緩沖液 B儀器、耗材 帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡實驗步驟 1. 培養并收獲 3L 1×106 細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。2. 用 2
核纖層和富含核纖層組分的制備實驗——哺乳動物組織細胞
實驗材料組織試劑、試劑盒溶液 H儀器、耗材尼龍網勻漿器實驗步驟組織制備1. 切碎組織，用加 250 mmol/L 蔗糖的 H 溶液清洗組織/組織培養物：溶液 H：15 mmol/L PIPES，pH 7.280 mmol/L KCl15 mmol/L NaCI0.5 mmol/L 精咪0.2 mmo
哺乳動物細胞制備核和細胞質提取物—核提取物制備優化
實驗材料轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）試劑、試劑盒高鹽緩沖液分別含 0.8、1.0、1.2、1.4 及 1.6 mol L KCl儀器、耗材貝克曼 JS4. 2 轉子或相當的轉子50 mL 圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用 15 mL 的離心管）Dounce 氏玻璃勻
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物—核提取物制備
實驗材料轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）試劑、試劑盒PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1. 2 mol L KCl透析緩沖液液氮儀器、耗材貝克曼 JS4. 2 轉子或相當的轉子50 mL 圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用 15 mL 的離心管）Dounce 氏玻璃勻漿器（B
核提取物的制備實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液后，可以降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。對于特定的蛋白質，影響蛋白質鹽析的主要因素：無機鹽的種類、濃度、溫度和PH值。
核提取物的制備實驗
實驗材料?哺乳動物試劑、試劑盒?PBS低滲緩沖液低鹽緩沖液透析緩沖液儀器、耗材?轉子離心機電導計透析膜勻漿機離心管實驗步驟 1a.? 收集轉瓶培養的細胞：將濃度為5~10×108細胞/l 的培養液用1 L 的塑料瓶1 850 g 離心20 min，將細胞收入50 ml 錐形離心管中（每管收2~3 L
哺乳動物中制備基因組DNA實驗——制備DNA
在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續的實驗打下基礎。一般真核細胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養細胞或低溫保存的組織細胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提而實現的。實驗材料動物組織試劑、
哺乳動物中制備基因組DNA實驗
制備DNA ? ? ? ? ? ? 實驗材料 動物組織 試劑、試劑盒
哺乳動物中制備基因組DNA實驗
實驗材料 動物組織試劑、試劑盒 PBS乙酸銨乙醇酚氯仿異戊醇TE儀器、耗材 離心機搖床研缽實驗步驟 1. ?切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結。?2. ?將200 mg~1 g 的組織用預冷的研缽和研杵研碎，或用錘子將其搗為細粉末，每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。?3. ?
核提取物的制備實驗（二）
從培養細胞中分離的細胞核制備成的提取物在體外轉錄和mRNA加工中具有精確的功能，（1）純化蛋白質（2）核提取物。實驗材料細胞核試劑、試劑盒KCl高鹽緩沖液儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?按基本方案中歩驟1~7操作。?2. ?將細胞核懸液分成5等份。在冷室內不斷攪拌，按如下方法在每份懸液中加入1
核提取物的制備實驗（一）
從培養細胞中分離的細胞核制備成的提取物在體外轉錄和mRNA加工中具有精確的功能，（1）純化蛋白質（2）核提取物。實驗方法原理通過向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液后，可以降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。對于特定的蛋白質，影響蛋白質鹽析的主要因素
核纖層和富含核纖層組分的制備實驗
實驗材料 組織試劑、試劑盒 溶液 H儀器、耗材 尼龍網勻漿器實驗步驟 組織制備1. 切碎組織，用加 250 mmol/L 蔗糖的 H 溶液清洗組織/組織培養物：溶液 H：15 mmol/L PIPES，pH 7.280 mmol/L KCl15 mmol/L NaCI0.5 mmol/L 精咪0.2
核纖層和富含核纖層組分的制備實驗
哺乳動物組織/組織培養細胞 爪蟾卵母細胞 果蠅胚 SPISULA ? ? ? ? ? ? 實驗材料 組織
核纖層和富含核纖層組分的制備實驗
哺乳動物組織/組織培養細胞爪蟾卵母細胞果蠅胚SPISULA實驗材料組織 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒溶液 H ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
核纖層和富含核纖層組分的制備實驗——SPISULA
實驗材料海蚌試劑、試劑盒溶液 S儀器、耗材Millipore 濾器離心機實驗步驟卵母細胞收集和制備1. 從成年海蚌中剝離卵巢和卵母細胞。然后在 1 g 重力作用下，用經 0.22 μm Millipore 濾器過濾的海水清冼幾次卵母細胞。勻漿2. 為了在不激活卵母細胞的情況下使卵黃膜去穩定，將洗過的
哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物—細胞質組分制備
實驗材料細胞質提取物試劑、試劑盒10× 細胞質提取緩沖液儀器、耗材Beckman 50型固定角轉子或相當的轉子實驗步驟1) 仔細測量細胞質提取物的體積（見基本方案步驟 7 中的上清）。加入 0.11 倍體積的10×細胞質提取緩沖液，充分混合。2)100 000 g 離心 1 h。3)將上清（± 10
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物
核提取物的制備 核提取物制備優化 細胞質（S-100)組分的制備 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物
實驗方法原理 實驗材料 轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）試劑、試劑盒 PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1. 2 mol L KCl透析緩沖液液氮儀器、耗材 貝克曼 JS4. 2 轉子或相當的轉子50 mL 圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用 15 mL 的離心管）Doun
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物
核提取物的制備核提取物制備優化細胞質（S-100)組分的制備實驗方法原理實驗材料轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞） ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒PBS ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
核纖層和富含核纖層組分的制備實驗——果蠅胚
實驗材料果蠅胚試劑、試劑盒溶液 E儀器、耗材研杵勻漿器實驗步驟胚收集和制備1. 可用任一種方法收集果蠅胚（Oregon R P2 或任何其他的野生系）。制備勻漿2. 直接在 9 倍體積的抽提緩沖液（溶液 E ) 中融化凍存胚。溶液 E：250 mmol/L 蔗糖50 mmol/L NaCl50 mm
HeLa－細胞核提取物的制備實驗
在本實驗中，基本上是按Dignam等（1983)所述的方法從HeLa細胞制備核提取物的。這一基本方法大概是制備體外轉錄和DNA結合實驗用因子的最常用的方法。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒甘油液氮MgCl2?6 H2O硫酸銨HeLa 細胞磷酸緩沖鹽溶液（PBS)緩沖液
HeLa－細胞核提取物的制備實驗
試劑、試劑盒?甘油液氮MgCl2?6 H2O硫酸銨HeLa 細胞磷酸緩沖鹽溶液（PBS) 緩沖液 G緩沖液 H 緩沖液 DTM 緩沖液+0.1 ml L KCl實驗步驟 材料HeLa 細胞（培養和保存條件見下文。我們也成功地使用過 CellexBiosciences 公司制備并冷凍的 HeLa 細胞
細胞核連綴分析實驗_從組織中制備細胞核
實驗材料動物組織試劑、試劑盒PBS蔗糖儀器、耗材電動勻漿器特氟隆研杵實驗步驟一、用超速離心法從組織中分離細胞核1. 切下動物組織，放入置于冰上的平皿中，用冰冷的 PBS 沖洗。2. 加少量蔗糖Ⅰ溶液，用剪刀或剃須刀片將組織切碎，轉入一個干凈試管中，加蔗糖Ⅰ溶液至終體積為每克組織 10 ml。3. 用
核纖層和富含核纖層組分的制備實驗——爪蟾卵母細胞
實驗材料卵巢試劑、試劑盒NaClKClMgSO4Ca（NO3）2CaCl2NaHCO3苯青霉素硫酸鏈霉素Na-HEPES儀器、耗材培養皿實驗步驟卵母細胞收集和制備1. 從成熟的雌性非洲爪蟾取整個或部分卵巢，在含 88 mmol/L NaCl，1 mmol/L KCl，0.9 mmol/L MgSO4
酵母細胞核制備實驗——差速離心法
細胞核（nucleus）是細胞中最大、最重要的細胞器（初中老教材認為細胞核不是細胞器，大學細胞生物學則認為是細胞器，這里以大學教材為準），它是由核膜（nuclear membrane）、核骨架（nuclear scaffold）、核仁(nucleolus) 幾部分組成。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒細胞
哺乳動物細胞瞬時基因轉移法制備重組蛋白實驗
一、轉染方法對于脂質體轉染 (Upofection), 可以從商業途徑獲得許多配方，這些配方都具有單一的ZL化組分，而且毫無疑問，它們中的大部分都能非常有效地將質粒 D N A 轉 人 細 胞 。其缺點是價格不菲—- 在使用這些試劑時，對于超出數百毫升規模的瞬時轉染，經濟上是不可行的。大
哺乳動物細胞瞬時基因轉移法制備重組蛋白實驗
報道顯 TK，在 過 去 的 1 0 年 ，已經開發出 了多種高效的瞬時轉染（transient transfection) 方法 ， 它們可 以 滿 足 甚 至 超出 了 上 述 需 求 。 目 前 蛋 白 質 的 瞬 轉 表 達 主 要 是 在H E K 2 9 3 衍生的細胞系中進行, 而同時
哺乳動物細胞瞬時基因轉移法制備重組蛋白實驗
實驗步驟 一、轉染方法 對于脂質體轉染 (Upofection), 可以從商業途徑獲得許多配方，這些配方都具有單一的ZL化組分，而且毫無疑問，它們中的大部分都能非常有效地將質粒 D N A 轉 人 細 胞 。其缺點是價格不菲
分離核仁實驗——HeLa細胞細胞核或核仁的制備
實驗材料HeLa細胞試劑、試劑盒PBS儀器、耗材Teflon-玻璃勻漿器實驗步驟1. 準備溶液：PBSRSB-8 10 mmol/L Tris；10 mmoI/L NaCl，8 mmoI/L 乙酸鎂，pH 7.4RSB 10 mmol/L Tris；10 mmol/L NaCl，1.5 mmol/L