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  • 發布時間:2022-02-13 15:15 原文鏈接: T淋巴細胞轉化試驗的詳細介紹

      樣本要求

      肝素抗凝血5ml,室溫

      參考值

      形態學檢測法:60.1%±7.6%。 3H-TdR滲入法:0~2%。 刺激指數(SI)>2為有意義。

      臨床意義

      1、T淋巴細胞在體外培養過程中受有絲分裂原刺激,可轉化成為體積較大的母細胞。計數轉化的細胞可反映機體的細胞免功能。

      2、細胞免疫功能缺陷或低下者,其轉化率可明顯低于正常,如運動失調性毛細血管擴張癥。此外,惡性腫瘤、霍奇金病、淋巴瘤、淋巴肉芽腫、重癥真菌感染、重癥結核轉化率可低于正常值,T淋巴細胞轉化率增高見于唐氏綜合征。

      3、估計疾病的預后和療效,惡性腫瘤和慢性白色念珠菌病患者,經免疫因子或免疫增強劑治療后可變為正常,反之,則預后不良。

      注意事項

      檢測方法可分為3H-TdR摻入法、形態學法和MTT法等。

      1、3H-TdR摻入法 T淋巴細胞受PHA或特異性抗原刺激后,發生有絲分裂,細胞進入S期,且伴隨新的DNA合成,若此時加入氚標記的胸腺嘧啶核苷3H-TdR,則3H-TdR可被淋巴細胞作為合成DNA的原料攝入,根據3H-TdR的攝入量,可判斷細胞的增殖程度。培養細胞用液體閃爍儀測量,記錄每分鐘脈沖數(cpm),通過計算,得出刺激數(SI),以此表示轉化能力。計算公式為SI (刺激指數)=PHA刺激管cpm均值/對照管cpm均值。

      2、形態學法 T淋巴細胞與有絲分裂原(PHA)或特異性抗原置37℃孵育72h,淋巴細胞會發生一系列形態變化,如細胞體積增大、胞漿深染、胞核增大、染色質疏松、核仁明顯等,此即為淋巴母細胞,然后通過顯微鏡計數,測出淋巴母細胞的百分率。

      3、MTT法 MTT為淡黃色偶氮唑鹽,活細胞特別是增殖細胞的線粒體脫氫酶活性增高,通過線粒體能量代謝過程,可將MTT代謝形成藍紫色的甲臜沉積于細胞內或細胞周圍,而且甲臜形成量與細胞增殖程度呈正相關,因此通過比色分析就能判斷出淋巴細胞的增殖程度。計算公式為:SI(刺激指數)=PHA刺激組吸光度(A)均值/對照管組吸光度(A)均值。

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