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  • 發布時間:2019-03-29 18:35 原文鏈接: SYPRORuby熒光染色實驗

    實驗方法原理到目前為止,在常用來檢測經聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后的蛋白質的方法中,SYPRORUBY 可能是最靈敏的突光染色方法了,它能檢測出僅含 1?2ng 蛋白的條帶。遺憾的是,如此微量的蛋白條帶經染色后用肉眼卻不可見,需要一個熒光掃描儀檢測(SYPRORuby 的最大激發光和發射光的波長分別是 280nm 和 450nm/610nm)。蛋白含量約 50ng 的條帶在紫外透射光的幫助下肉眼可見。本方案是由 GenomicSolution 提供的 SYPRORuby 染色方法改寫而來。這種方法也與質譜兼容。關于熒光檢測技術,包括成像裝置和檢測設備等,請詳閱 Patton(2000)。
    實驗材料

    單向凝膠電泳分離后的蛋白樣品

    試劑、試劑盒

    甘油

    儀器、耗材

    鋁箔熒光掃描儀塑料容器

    實驗步驟

    1.電泳結束后,將凝膠置于盛有試劑 A 的塑料容器中,試劑 A 的量要足夠覆蓋整塊凝膠。例如,一塊典型的 mini 膠(8 cmXIOcm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的試劑 A。

    2.室溫下搖動凝膠 30 min。

    3.棄去使用后的試劑 A,加入足夠覆蓋凝膠量的 SYPRORuby 染料,用鋁箔遮蓋好容器,室溫下搖動凝膠 90 mm 至過夜。

    未使用過的 SYPRO Ruby 染料僅需染色約 2 h,突光掃描儀(MolecularDynamicsTyphoon8600 或類似產品)就能檢測到 Ing 條帶。若重復使用染料按步驟③染色 2 h,靈敏度將下降,只能檢測到約 Sng 蛋白含量的條帶。

    4.棄去 SYPRO Ruby 染料(或者保存起來以備后用,見步驟③的注解)。

    5.加人適量的試劑 B,室溫下搖動 30~60 min。

    6.將熒光掃描儀設置在 523nm 處對凝膠掃描,或者將凝膠保存在適量的 2% 甘油中。

    凝膠在 2% 甘油中可保存 6 個月,而且熒光信號不會減弱。

    7.若要長期保存凝膠,應用干膠機或讓凝膠在空氣中干燥。若采用空氣干燥凝膠,需將凝膠放在兩張濕的玻璃紙中間,拉緊玻璃紙,待膠靜置于空氣中變干。空氣干燥后的凝膠可永久保存

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