PCRSSP在造血干細胞移植配型中的應用

　　人類白細胞抗原(HLA)系統是一組組成和結構都非常復雜的基因復合體。HLA分型首先采用血清學方法，現在DNA分型是常規方法。我們采用序列特異性引物(PCR-SSP)技術對HLA-Ⅰ類基因進行分型，現報告如下。

　　1  材料與方法

　　1.1  樣本 

　　青島地區擬進行造血干細胞移植的20例惡性血液病患者及其30例相關供者的血液標本。

　　1.2  方法 

　　采用Gentra試劑盒提取DNA，用基因定量儀測定濃度和純度。基因擴增采用Micro SSPTMHLA-A/B/DR DNA分型試劑盒，嚴格按照說明書操作。擴增產物2%瓊脂糖進行電泳后凝膠成像系統判讀結果。

　　2  結果
 
　　對50例造血干細胞移植供受者HLA-Ⅰ類基因進行了成功的分型。

　　3  討論

　　HLA基因位于人類第6號染色體短臂6p21.31，HLA復合體結構十分復雜，具有多基因性和多態性。異基因造血干細胞移植是治療惡性白血病的有效方法，但移植后會發生GVHD嚴重影響移植效果，移植前供、受者HLA配型可以有效的防止GVHD的發生。

　　HLA配型技術包括血清學、細胞學和DNA分型技術。隨著對HLA-Ⅰ類分子研究的不斷深入，新確定的特異性位點逐年增加，血清學方法無法獲得能夠分辨出所有特異性位點的標準抗血清，且血清學之間有交叉反應。細胞學方法由于分型細胞來源困難、方法繁瑣、試驗流程長，不適于常規檢測。PCR-SSP方法操作簡單快速，重復性好，實驗結果容易判讀，雜合子也很容易檢出，是目前應用比較廣泛的DNA分型技術［1，2］。我們在50例樣本中都能成功分型，沒有假陽性和假陰性，整個實驗可在3h內完成。

　　綜上所述，HLA-Ⅰ類基因分型PCR-SSP技術準確、特異，可作為造血干細胞移植配型和正常人群無關供者篩選的常規方法。

　　【參考文獻】

　　1  Maduigal JA，Arguello R，Scott I，et al.Molecular histocompatibility typing in unrelated donor.one marrow transplantation.Blood Rev，1997，11(5)：105-117.

　　2  戴宇東，孫啟俊，張益紅，等.應用PCR-SSP進行HLA-AB基因分型及血清學方法的比較.臨床檢驗雜志，2001，19：272-273.