DMD(Duchenne Muscular Dystrophy)和BMD(Becker Muscular Dystrophy)是一種常見的X連鎖隱性遺傳病，主要發生于男性，其發病率為1/3500活產男嬰，其發生的原因是Dystrophin(抗肌萎縮蛋)其固缺陷所致.
一、DMD/BMD的臨床表現
在臨床上DMD較BMD常見，發病早，癥狀重，正常于2-3歲即出現骨骼肌無力的表現，一般從骨盒帶肌肉無力開始而出現一系列的特殊癥狀:走路困難呈鴨步，出現Gower's征，腓腸肌進行性肥大.逐漸出現心肌細胞受損，約30%的小兒智能力缺陷.在12歲左右失去能力，至20歲時正常死于呼吸衰竭和心力衰竭.而BMD相對來說癥狀較輕，進展亦較慢.
二、DMD/BMD的遺傳病
(一)遺傳方式:X-連鎖隱性遺傳，發病者多為男性，其母親為致癌基因攜帶者，尚有1/3的患者為散發病例，則新生突變引起.
(二)，DMD/BMD的致病基因:1.基因定位:DMD/BMD是因位于Xq21，其基因非常大約為2400Kb.2.基因結構:該基因共有79個外顯子，78個內含子，其CDNA全長約為13974個時，編碼的肽鏈含3685aa殘基，編碼蛋白命名為dystrophine，其基本5個獨立的啟動子，在DMD基因內還存在一些STR，已知有13個STR，其中5'端編碼區有8個，3'端編碼區有1個，44，45，49，30，50內含子各有一個STR，是多為DNDR核心是(CA)n.等位基因數目為2-19個.
三、DMD基因的突變類型
(一)缺失與重復:研究表明約65%的DMD/BMD是由于基因內的部分缺失所致，尚有12.5%病例有基因內重復，這種突變變有兩個高頻發生區，一個在基因的5端，另一個大致在第45～55外顯子區域，而5'端的缺失重復熱點大致在第1～7外顯子區域.缺失的范圍從1至數個外顯子，甚至整個DMD基因亦可發生缺失，啟動子區亦有缺失發生.
(二)單堿量換:近年來的研究還發現，在DMD基因內尚有單堿其置換，目前已發現的約有6種，根認為在DMD患者中由此型突變引起者占30%左右.
(三)基因內連接形成和mRNA剪接異常:以上兩種類型的突變亦在DMD人群中有抗，但因研究的病印例尚少，需要進上步的研究.
四、利用PCR技術診斷DMD的途徑
(一)用PCR技術檢測缺失型突變.
利用PCR可直接檢出DMD/BMD的缺失型突變，由于DMD/BMD發生時，其65%的患者為基因缺失所致，因此直接檢測缺失可使65%的患者得到診斷.在DMD/BMD基因的缺失中，其缺失范圍，缺失的位置具有高度異質性，加之DMD/BMD基因較大，很難用一對引物確定其缺失部位，隨著DMD/BMD基因的克隆及其精結構的闡明，有人開發了多時引物進行多重PCR，從而可使幾乎全部的缺失型DMD/BMD得到診斷.
1.利用6對引物擴增處于缺失熱點區域的6個外顯子，即外顯子8，16，19，44，45和48，再加上外顯子4，12，51的3對引物，可檢測80%的缺失，若再用Beggs等設計的另外九對引物即外顯子3，6，13，46，47，49，50，52，30，60及啟動子的引物，進行多重PCR，可使98%的缺失型患者得到診斷，各引物的序列及擴增片段大小見表.
在用多重PCR進行DMD/BMD基因的缺失型檢測時方便簡便，快速，在擴增后，用瓊脂糖凝膠電泳溴乙錠染色可根據擴增產物的有無判斷結果.擴增時的分清情況見下表:
DMD基因PCR擴增引物
外顯子 | 引物序列(5'--3') | 產物片段 |
Pm | GAAGATCTAGACAGTGGATAC ATAACAAATGCATG | 535 |
| TTCTCCGAAGGTAATTGCCTC CCAGATCTGAGTCC | ||
3 | TCATCCATCATCTTCGGCAG ATTAA | 410 |
| CAGGCGGTAGAGTATGCCA AATGAAAATCA | ||
4 | TTGTCGGTCTCCTGCTGGTC AGTG | 196 |
| GAAAGCCCTCACTCAAAC ATGAAGC | ||
6 | CCACATGTAGGTCAAAAA TGTAATGAA | 202 |
| GTCTCAGTAATCTTCTTAC CTATGACTATGG | ||
8 | GTCCTTTACACACTTTAC CTGTTGAG | 360 |
| GGCCTCATTCTCATGTTC TAATTAG | ||
12 | GATAGTGGGCTTTACTTA CATCCTTC | 331 |
| GAAAGCACGCAACATAA GATACACCT | ||
13 | AATAGGAGTACCTGAGAT GTAGCAGAAAT | 238 |
| CTGACCTTAAGTTGTTCT TCCAAAGCAG | ||
17 | GACTTTCGATGTTGAGAT TACTTTCCC | 416 |
| AAGCTTGAGATGCTCTCA CCTTTTCC | ||
19 | TTCTACCACATCCCATT TTCTTCCA | 459 |
| GATGGCAAAAGTGTTG AGAAAAAGTC | ||
43 | GAACATGTCAAAGTCA CTGGACTTCATGG | 357 |
| ATATATGTGTTACCTAC CCTTGTCGGTCC | ||
44 | CTTGATCCATATGCTTT TACCTGCA | 268 |
| TCCATCACCCTTCAGA ACCTGATCT | ||
45 | AAACATGGAACATCCT TGTGGGGAC | 547 |
上 | CATTCCTATTAGATCTG TCGCCCTAC | |
47 | CGTTHTTHCSTTTHTCT HTTTCAGTTAC | 181 |
| GTCTAACCTTTATCCA CTGGAGATTTG | ||
48 | TTGAATACATTGGTTA AATCCCAACATG | 506 |
| CCTGAATAAAGTCTT CCTTACCACAC | ||
49 | GTGCCCTTATGTACCA GGCAGAAATTG | 439 |
| GCAATGACTCGTTAAT AGCCTTAAGATC | ||
50 | CACCAAATGGATTAA GATGTTCATGAAT | 271 |
| TCTCTCTCACCCAGT CATCACTTCATAG | ||
51 | GAAATTGGCTCTTTA GCTTGTGTTTC | 388 |
| GGAGAGTAAAGTGA TTGGTGGAAAATC | ||
52 | AATGCAGGATTTGGA ACAGAGGCGTCC | 113 |
| TTCGATCCGTAATGA TTGTTCTAGCCTC | ||
60 | AGGAGAAATTGCGCC TCTGAAAGAGAACG | 139 |
| CTGCAGAAGCTTCCA TCTGGTGTTCAGG |
(二)單個堿基置換的檢測
單堿是置換在DMD/BMD的發生中占有重要地位，但DMD/BMD是因單堿基置換近年來才受到人們的重視，它對發現新突變，確定單堿基置換與DMD/BMD發生的關系具有重要意義，推測的方法主要是用RT-PCR-SSCP及全套式RF-PCR檢測.
(三)利用PCR-RFLP和Amp-FLP進行連鎖分析診斷DMD/BMD
若在一個家庭中，已有一個先證者，則首先利用多重PCR檢測其缺失，若不能確定其缺失的部位或不能診斷，或其它條件所限，則可用PCR-RFLP和Amp-FLP進行連鎖分析，確定風險染色體.
1.PCR-RFLP
用多重PCR不能檢出非缺失型DMD/BMD患者及攜帶者，現在可用PCR方法擴增多態性位點區域，同適當的內切酶酶解擴增產物，電泳分離后可對多態性位點進行分布，利用PCR-RFLP連鎖分析，即可進行DMD/BMD風險個體的攜帶者的檢出，下表序列即為常用的幾個多態性位點檢測時的引物及擴增酶解情況.
擴增區域 | 引物序列 | 限制性酶 | 擴增產物 | 水解片段 |
| PERT87-1 | 5'GTCAGTTGGTCAGT AAAAGCC3' | B5＋NⅠ | 400bp | 400/250＋150 |
| PERT87-8 | 5'CCAATTAAAACCA CAGCAG3' | TaqⅠ | 155bp | 145＋10/74＋ 71＋10 |
| pERT87-15 | 5'GACTGGAGCAAGG GTCGCC3' | XmaⅠ | 740bp | 730＋10/520＋ 210＋10 |
| PERT87-15 | 5'ACAATTTCCCTTT CATTCCAG3' | BamHⅠ | 226bp | 216＋10/166＋ 50＋10 |
| MPIP | 5'TCCAGTAACGGA AAGTGC3' | AluⅠ | 60bp | 60/56or52 |
| 841Q | 5'ATAATTCTGAATA GTCACAAAAG3' | MaeⅢ | 252bp | 236＋16/128＋ 108＋16 |
2.AmP-FLP
在DMD/BMD基因區內有多個(CA)n重復區域，這些區域可用OCR方法進行擴增，增產物同聚丙烯酰胺凝膠電泳技術進行分析擴增片段大小，然后與先證者及母親進行對比，亦是檢出患者與攜帶者的理想多態性標記，現將在我國人群中已作分析的(CA)n區引物及多態性片段，PIC列表示下:
位置 | 名稱 | 等位基因 | 引物序列 | 片段 | PIC |
5'腦組織特異啟動子 | DYS-Ⅱ | 8 | F5'TCTTGATATATAGGGA TTATTTGTGTTTGTTATAC | 214-218 | 0.750 |
| R5'ATTATGAAACTATAAG GAATAACTCATTTAGC | |||||
3'非翻譯區 | 3'CA | 4 | F5'GAAAGATTGTAAACTA AAGTGTGC | 119-137 | 0.375 |
| R5'GGATGCAAAACAATG CGCTGCCTC | |||||
內含子 | 44CA | 9 | F5'TCCAACATTGGAAAT CACATTTCAA | 174-204 | 0.072 |
| R5'TCATCACAAATAGAT GTTTCACAG | |||||
45CA | 7 | F5'GAGGCTATAATTCTTT AACTTTGGC | 156-184 | 0.772 | |
| R5'CTCTTTCCCTCTTTAT TCATGTTAC | |||||
49CA | 11 | F5'CGTTTACCAGCTCAA ATCTCAAC | 227-257 | 0.870 | |
其他網友還關注過 |