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  • 發布時間:2020-07-20 20:22 原文鏈接: ELISPOT酶聯免疫斑點分析簡介(三)

    ELISPOT 技術優勢


    圖注:ELISPOT 法在檢測低頻率產生細胞因子的細胞時具有獨一無二的敏感性。將指定數目的能產生 IFN- 的T細胞與一百萬個抗原呈現細胞(Antigen Presenting Cells,APC)混合后,使用 ELISPOT 法(上圖)、胞質內染法(中圖)和 ELISA 法(下圖)分別測量產生 IFN- 的細胞的數目。

    ELISPOT 分析使單細胞分泌產物可視化。這些分析異常敏感,因為它是在直接在分泌細胞的周圍進行捕捉,而且是在表面被沖淡,或者被臨近的細胞上的受體捕獲,或降解之前。

     

    • 最低至1:100萬細胞精度的活體外頻率測量。這種分辨率已經遠遠超過使用細胞內細胞因子的四聚物染色和 ELISA 法測量的精度。這種高敏感度是非常關鍵的,因為抗原特異性 T 細胞在體外都是典型性的低頻率。

    • 高產量 T 細胞分析成為可行。一個經過訓練的相關實驗室小組可以測試成百的樣本中幾十種抗原的反應。

    • 只需要少量細胞,就可以用于通其他細胞學分析方法進行比較。例如,45毫升的血液就足以用于測試600種不同抗原/肽類物質的反應。

    • 可以定義CD4和CD8細胞的免疫因子指標。這是因為只需要少數細胞,分析就可以在高產量模式下進行。ELISPOT 分析在篩選肽庫,繪制免疫因子方面是一個理想的工具。

    • 用于確定抗原特異性 T 細胞的功能性親和力。這最大可能受到肽類藥物刺激至50%的影響。

    • 可以用于研究未經藥物處理過的細胞的分泌過程。如果觀察到凈產量減少,可以確定這種區別是來自于分泌細胞的減少,還是每個細胞分泌產量的減少。

    • 淋巴細胞在 ELISPOT 分析后依然存活。這使得分析之后進行增值,用于更進一步的分析、克隆或者低溫儲藏成為可能。

    • 低溫儲藏后的人類淋巴細胞可以用于檢測,而不會丟失其功能。治療前和治療后的樣本可以并排進行測試,結果可以重復。


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