在ELISA試驗中,洗刷是關鍵過程之一。而有一些參數會影響洗刷過程的作用,這些參數包括吸液高度和吸入方位,這兩者都能調整,以下降布景(殘留量)和差異。下面我們就一起來看看今日的要點內容,與您談說ELISA抽吸的操作技巧。
殘留液體中包括未結合的抗原或抗體,它們會添加布景信號。殘留量越小,殘留液體越少,轉移到下一步的攪擾液體也就越少。吸液高度會顯著影響殘留量;假如洗刷吸頭與反響孔底部的間隔稍大,那就會讓殘留量急劇添加。反之,假如洗刷吸頭壓著反響孔底部,那么也會使吸液功率下降,殘留量添加。
現在的洗板機一般運用兩種類型的洗頭:剛性和起浮的。起浮洗頭中的吸頭可在洗刷過程中自由上下移動,而剛性洗頭則固定在恰當的方位。運用剛性洗頭的洗刷操作在優化起來更為雜亂,由于您需求十分細心地調整吸液高度。假如您們試驗室運用幾種不同的板,那可能會很耗時。在運用起浮洗頭時,吸頭會降到反響孔的底部。調整高度就不是很重要,因而洗頭會下降到底部。
抽吸的方位也對殘留量有著重要影響;假如每個孔只運用一個抽吸點(這很常見,由于更快),那么抽吸的方位需求優化。最佳的方位取決于洗頭的性狀,但它簡直不在反響孔的中心,即便這是一切洗頭最常見的默許方位。一般來說,最佳方位在孔中心與孔壁之間的某處。
反響孔的形狀也會影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。
假如沒有主動洗板機,選用手藝洗刷,那么也需求留意幾點。運用8道或12道微量移液器,選用倒吸的辦法進行洗刷;不同廠家的洗液不宜彼此混用。洗板時需確保微孔板平放,將洗刷液注滿各孔,但盡量防止漏液,以每孔300 μl為宜;板洗次數一般為3次,要確保洗板的浸泡時刻,每次浸泡時刻一般為30-60 秒;盡量削減洗液殘留量,引薦每次洗板后進行決定,并及時替換吸水紙,防止吸水紙的碎屑粘到反響孔內。