實驗材料 DNA
試劑、試劑盒 雜交液洗膜液
儀器、耗材 注射器超聲儀水浴鍋
實驗步驟
1. 用5~20 ml 雜交液Ⅰ依次浸泡10~20張硝酸纖維素濾膜。濾膜裝入雜交袋中,加入足夠的雜交液,密封后42℃預雜交1 h。
2. 往帶螺蓋的試管中,加入放射性探針和2 mg 超聲波處理的鯡魚精DNA,煮沸10 min。
3. 探針混合液移至冰浴,加入2 ml 雜交液Ⅰ 。
4. 用帶18-G針頭的注射器將探針混合液加入到雜交袋中濾膜上,重新密封后于42℃溫育過夜。
5. 用約500 ml 低嚴緊性洗膜液Ⅰ于室溫洗滌濾膜3次,每次10~15 min。
6. 再用約500 ml 高嚴緊性雜交液Ⅰ(預熱到洗滌溫度)洗滌濾膜2次,每次15~20 min。
7. 用塑料保鮮膜將濕潤的濾膜包裹好,或讓它貼在一塑料板上干燥后進行放射自顯影。