二、材料待測的DNA 模板，可用雙鏈或單鏈模板。
三、設備高壓電泳儀，測序用電泳槽，照相顯影用大號塑料盆，制膠設備，吹風機，放射自顯影盒，X-光片。
四、試劑
1、5×T7 DNA 聚合酶緩沖液：200mmol/L Tris?Cl，pH7.5，100mmol/L MgCl2，250mmol/L NaCl。
2、引物：使用通用引物pUC/M13正向或逆向引物。
3、DTT ： 0.1mol/L。
4、5×常規標記混合物：7.5mmol/L dGTP，7.5mmol/L dCTP，7.5mmol/L dTTP。
5、5×dITP標記混合物：15mmol/L dITP，7.5mmol/L dCTP，7.5mmol/L dTTP。
6、dNTP A溶液（適用于dGTP): 80mmol/L dGTP，80mmol/L dATP，80mmol/L dCTP，80mmol/L dTTP，50mmol/L NaCL。
7、ddG終止混合物 (適用于dGTP)：dNTP A溶液再加 8mmol/L ddGTP。
8、ddA終止混合物 (適用于dGTP)：dNTP A溶液再加 8mmol/L ddATP。
9、ddT終止混合物(適用于dGTP)：dNTP A溶液再加 8mmol/L ddTTP。
10、ddC 終止混合物(適用于dGTP)：dNTP A溶液再加 8mmol/L ddCTP。
11、dNTP B溶液（適用于dITP): 160mmol/L dITP，80mmol/L dATP，80mmol/L dCTP，80mmol/L dTTP，50mmol/L NaCl。
12、ddG終止混合物(適用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddGTP。
13、ddA 終止混合物(適用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddATP。
14、ddT 終止混合物(適用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddTTP。
15、dd C終止混合物(適用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddCTP。
16、測序用T7 DNA 測序酶。
17、酶稀釋緩沖液：10mmol/L Tris?HCl，pH7.5，5mmol/L DTT，0.5mg/ml BSA 。
18、終止溶液： 95%甲酰胺，20mmol/L EDTA，0.05%溴酚蘭，0.05%二甲苯蘭 。
19、[a-32P]dATP 或[a-35S]-dATP，35S的優點是可使條帶為窄而清晰，并且操作更為安全。放射強度為：1000-1500Ci/mmol，10mCi/ml。
20、TE緩沖液：10mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，pH7.5。
21、上節所述的凝膠制備過程中的全套試劑。
22、X光顯影液：H2O：50℃ 800ml，米吐爾 2.2g，無水Na2SO3 72g，對苯二酚 8.8g，無水NaCO3 48g ，KBr 4g， 定容至1000ml備用。
23、F-5堅膜定影液：水600ml ，Na2S2O3 240g，Na2SO3 15g，冰醋酸 13.4ml；硼酸 7.5g ，粉狀鉀礬 15g ，定容至1000ml 備用。
24、TYP肉汁培養基：16g蛋白胨，16g酵母提取物，5g NaCl，2.5g K2HPO4，加水溶解，定容至1000ml。
25、20%PEG/3.75mol NH4Ac 溶液：40% PEG（分子量8000）儲備液和7.5mol/L pH7.2 NH4Ac 儲備液等體積混合。
五、操作步驟：
（一）、模板制備
1、M13單鏈模板制備：在轉化入合適的大腸桿菌宿主菌且在含有指示劑如X-gal/IPTG的培養基上鋪板之后，含有M13重組子的細胞將表現出無色的"噬菌斑"，事實上受感染的細胞并非被噬菌體溶菌或殺死，出現噬菌斑是因為被感染的細菌在生長速度上比其周圍未感染的細菌慢的緣故，從無色噬菌斑上得到的感染細胞經培養便能產生測序反應所需的單鏈模板。