C反應蛋白的純化研究及臨床具體應用

C-反應蛋白主要在肝臟中合成，是人類最重要的急性時相反應的蛋白之一，成功分離純化出人CRP，可用于進行生產研究。醫學研究上的C-反應蛋白純化常常包含在一些生物服務公司提供的蛋白純化服務中。一些公司提供的蛋白純化服務可以獲得高純度的蛋白質，可以滿足蛋白質的折疊或重結晶等精細實驗要求。

C-反應蛋白（CRP）是機體受到微生物入侵或組織損傷等炎癥性刺激時肝細胞合成的一種急性相蛋白，它是高度靈敏的炎癥指標，在臨床上具有感染的診斷與鑒別、抗生素的治療監測、預測將來心肌梗塞與中風的危險性等作用。CRP在健康人血清中濃度很低，而在細菌感染或組織損傷時，其濃度顯著（10倍甚至百倍）升高，而且上升和下降都很迅速。從臨床血清樣本分離純化獲得人C-反應蛋白（CRP），蛋白質純化是一系列復雜的過程的組合，有粗分離、初步純化和精細純化等多個步驟。蛋白純化服務方法有抽提、沉淀、離心、層析等多種服務手段。美迪西生物醫藥是一家臨床前醫藥研發外包服務公司，可以根據客戶要求提供蛋白純化服務。

1、人C-反應蛋白純化研究

蛋白純化是將目標蛋白質從細胞裂解液的全部組分中分離出來，同時仍保留蛋白的生物學活性及化學完整性。運用鹽析法、DEAE離子交換層析和親和層析等方法從臨床血清樣本中分離純化出CRP，用于免疫山羊制備多克隆抗體，初步建立免疫透射比濁法測定CRP并進行評價。SDS-PAGE結果顯示純化產物出現相對分子質量約為23000的主帶，Western Blotting結果顯示純化產物能與CRP單克隆抗體發生特異性結合，證實純化產物為CRP，與商品CRP有很好的可比性性。以自提CRP制備出效價高、特異性強的多克隆抗體，運用該抗體建立的CRP免疫透射比濁法具有比較好的性能。而成功分離純化出人CRP，可用于進行生產研究。

2、C-反應蛋白在臨床上的應用

（1）肺炎、支氣管炎和心梗等疾病的診斷

對疑似肺炎者，C-反應蛋白被認為是篩查的第一線檢查方法，CRP大于60mg/L常提示為細菌性肺炎。急性支氣管炎很少源于細菌感染，也很少導致C-反應蛋白顯著升高。所以CRP測定可以幫助鑒別肺炎和支氣管炎。

急性心梗時CRP升高，在無溶栓治療時與梗死范圍呈正相關。在與梗塞有關的冠狀動脈完全堵塞時CRP更高。廣泛梗死時C-反應蛋白平均160mg/L；局部梗死時C-反應蛋白平均60mg/L。

（2）細菌感染和病毒感染的診斷

當發生各種感染性疾病時，其組織損傷物質及炎癥物質大量進入血液循環，通過相應的細胞因子介導刺激肝臟合成CRP，導致機體反應的CRP升高。細菌的內毒素是急性時相反應的最有效的刺激，所以最高水平的CRP可發生在革蘭陰性菌感染，有時高達500 mg／L。革蘭陽性菌感染、寄生蟲感染通常會引起中等程度的反應，典型的是在100 mg/L左右。

但病毒不具有完整的細胞結構，CRP不能與之結合，所以病毒感染時一般輕度或不升高。但腺病毒及某些皰疹病毒可造成較大的組織損傷使得C-反應蛋白輕度增高。病毒感染一般低于10 mg/L ，通常不超過50 mg/L。

CRP在細菌感染發生后4～6小時即開始升高，36～48小時達到高峰，因為CRP半衰期只有4 - 7小時，所以在感染控制后其含量急驟下降，3-7天內可恢復正常。細菌感染，CRP含量一般高于20 mg/L。

CRP為急性時相反應蛋白，在感染時反應速度快，與WBC感染指標相比，CRP更加敏感。而且CRP不受生理，免疫狀態，藥物治療等影響。所以CRP為鑒別細菌感染與病毒感染的首選指標。可在感染早期可靠地判斷究竟是細菌感染還是病毒感染，以決定是否進行抗生素治療。

（3）新生兒與老年患者感染性疾病的診斷

CRP在兒科感染疾病應用的分界值為<10mg/L，新生兒感染分界值為2mg/L，大于32mg/L常提示感染。如不是新生兒，病程大于6-12小時，CRP<10mg/L可基本排除細菌感染或細菌已被清除。若>25mg/L常提示細菌感染。老年人可能有感染較早卻無發熱、白細胞升高等情況，這時測C-反應蛋白有助于檢出細菌感染。

（4）評價抗生素治療效果的指標

CRP是評價抗生素治療效果的獨立指標，可以很好地用來檢測急性細菌感染及判定抗生素療效，在粒細胞缺乏或作免疫抑制療法時尤為適用。對抗生素治療患者，在抗生素治療前和治療后24h、治療結束前各作常規檢測一次。對抗菌治療有良好反應的患者，其CRP值的下降非常迅速，通常24小時可以下降一半。CRP下降至正常時，中斷抗生素治療。

（5）預測將來心肌梗塞與中風的危險性

CRP是心血管疾病最強的危險指標，美國疾病控制預防中心建議其用于心血管疾病預防篩選指標，可預測將來急性心梗及中風的危險性。低度風險：<1mg mg/L；中度風險1-3 mg/L；高度風險3-10 mg/L；大于10 mg/L，可能存在感染，應治療后復查。

CRP含量>2.1mg/L的人與<1mg/L者比較：將來發生心肌梗塞的危險性為后者的2.9倍；發生缺血性中風的危險性為后者的1.9倍；發生外周動脈血管性疾病的危險性為后者的4.1倍。

（6）用于自身免疫性疾病的診斷

SLE、多肌炎、混合性結締組織病、潰瘍性結腸炎，CRP輕度升高或不升高。如果SLE患者CRP顯著升高強烈提示并發了細菌感染，而與病情活動程度無關。而類風濕關節炎患者CRP水平與疾病的嚴重程度、關節的咬合程度及受累關節數相關。

（7）惡性腫瘤的診斷

惡性腫瘤患者CRP大都升高。如CRP與AFP的聯合檢測，可用于肝癌與肝臟良性疾病的鑒別診斷。CRP測定用于腫瘤的治療和預后有積極意義，手術前CRP上升，手術后則下降。且其反應不受放療、化療和皮質激素治療的影響，有助于臨床估價腫瘤的進程。 

（8）外科疾病手術治療后的觀察

患者施行手術后24～72h血中CRP水平明顯升高，約在第5～7天恢復正常。凡驟升后持續高水平甚至增高，應懷疑合并感染。對中、大手術患者，在術前和術后3～7天各作常規檢測一次。急性闌尾炎的診斷常基于醫生對臨床癥狀的檢查，誤診率較高，未穿孔者CRP輕度增高，在20mg/L以上。約15% - 25％闌尾穿孔病人CRP常超過100mg/L。如WBC和CRP均正常，則急性闌尾炎的可能性不大。CRP＞100mg/L提示可能穿孔。

（9）婦產科疾病的診斷

盆腔炎和子宮附件炎，CRP值升高。盆腔腫塊和子宮肌瘤通常多為陰性。

（10）白血病患者并發感染

急性白血病患者合并感染的早期，中性粒細胞減低而診斷困難。所以這時候連續監測CRP對發現隱蔽性的細菌感染是一種非常有效的帥選試驗。若CRP 顯著升高（＞100mg/L）提示白血病患者合并感染，應及早使用抗生素。

最后需要說明的是，CRP是非特異性指標，在臨床實際工作中要注意結合病史、癥狀、體征和其他輔助檢查結果，綜合分析病情。