B細胞分泌抗體的檢測

基 本 方案

材 料

外周 血 單 個 核 細 胞（P B M C ; 單 元 8.1)

RPMI- 5 和 RPMI-IO 完全培養基

P W M 溶液
9 6 孔 平 底 培 養 板（Costar)

1 . 計 數 PBMC (附錄 3A ) ， 用 RPMI-5 完全培養基調整濃度至 4 X 10⁷ 個細胞/2m l 。室溫 ， 400 g 離 心 IOmin，棄上清。加 入 RPMI- 5 完全培養基，重復洗滌至少 4 次 。

2 . 再次計數 P B M C ，用 R P M I -I O 完全培養基調整濃度至 5X I O ⁵ 個細胞/ml。在 9 6 孔板中加入 0.2m l 細 胞 懸 液（每 孔 I X I O ⁵ 個細胞）。各實驗組設 2 復孔。避免使用培養板四周邊緣的孔。細胞培養時間較長時，周邊孔中應加滿水以減少實驗孔的液體揮發。

3 . 加 入 20ul PWM (最終稀釋度 1 : 1 0 0 ) 誘 導 PBM C 活化。本底對照組不加刺激。細胞置 于 37°C ， 5 % C 0 2 細胞培養箱中培養（E L I S P O T 檢 測 ，一 般 需 培 養 7d ; ELISA檢測上清，需 IOd)。

4 . 收集細胞進行后續反向空斑實驗（單 元 7. 13)、 E L I S P O T 檢 測（單 元 8. 1 1 ) 或收集培養上清進行 E L I S A 檢 測（單 元 8. 12)。