基因槍活體植物基因轉染
本實驗所用基因傳遞系統（基因槍）原理：低壓基因遞送系統（GDS-80 基因槍 U.S. Patent Number: 6,436,709 B1），根據火箭噴嘴原理和空氣動力學原理設計，是用于傳遞生物微粒進入靶細胞的一種新型系統。如圖1中所示，當左側出現輸入氣體壓力時（如：氦氣），兩個腔室之間將形成巨大的壓力差，一旦該氣體穿過裝載樣品的咽喉處，GDS-80 中的氣體輸出將為生物粒子提供足夠的動能量，使它們加速到接近超音速的速度（約 300m/s）。在加速過程中，樣品溶液會霧化并均勻地噴灑到靶向目標的表面上。影響轉染效率的因素：在執行 GDS-80 轟擊的同時，有四個主要因素影響轉染效率。涉及火箭噴嘴設計原理方面，有兩個：傳遞壓力的設定和槍管的直徑。通過增加輸送壓力的設定，可以使兩個腔室中的壓力差變大，從而增加生物微粒的速度，增加動能；而增大槍管直徑會降低微粒的輸出速度。傳遞距離也在實驗中起到重要的作用，通過增加從槍管到目標樣品的傳......閱讀全文
基因槍活體植物基因轉染
本實驗所用基因傳遞系統（基因槍）原理：低壓基因遞送系統（GDS-80 基因槍 U.S. Patent Number: 6,436,709 B1），根據火箭噴嘴原理和空氣動力學原理設計，是用于傳遞生物微粒進入靶細胞的一種新型系統。如圖1中所示，當左側出現輸入氣體壓力時（如：氦氣），兩個腔室之間將形成巨
基因槍介導pVaxDsredIRESEGFP質粒轉染體外培養細胞
[摘要] 目的：建立基因槍子彈制備以及轉染體外培養cos-7細胞系的方法，觀察基因槍介導真核表達質粒pVax-Dsred-IRES-EGFP在細胞內的表達情況。 方法：亞精氨、氯化鈣沉淀法制備子彈，利用原子力顯微鏡觀察子彈制備（DNA+金顆粒）情況；以基因槍的方法分別轉染對照組和實
基因槍介導pVaxDsredIRESEGFP質粒轉染體外培養細...（三）
2討論?基因槍技術, 又稱為微粒轟擊技術( Particle Bombardment Technology),其基本原理就是將外源基因包裹到比重較大而化學性質很穩定的微米級的金或鎢上,然后用微粒加速裝置打入靶細胞或組織。早期多用于在植物中轉移基因。它通過提供給包裹有DNA的金顆粒很高的初速度,使
基因槍介導pVaxDsredIRESEGFP質粒轉染體外培養細...（二）
2?結果 ? 2.1?重組質粒pVax-DsRed-IRES-EGFP的酶切鑒定 ????pVax載體是被美國藥品及食物鑒定委員會承認的用于疫苗臨床使用的真核表達載體，它具有卡那霉素抗性，非常適合于人體的應用。制備基因槍子彈之前，先對本室構建保存的真核表達載體pVax-Dsred-IRES-EGFP
基因槍介導pVaxDsredIRESEGFP質粒轉染體外培養細...（一）
基因槍介導pVax-Dsred-IRES-EGFP質粒轉染體外培養細胞系的實驗研究張 亮1 閻瑾琦1馬繼堯2 王 浩1 劉 寧1 賈銳1 韓 剛2 董金凱2 田仁禮2 于繼云[1]1.軍事醫學科學院 基礎醫學研究所，北京 100850； 2.解放軍總醫院 泌尿外科，北京 100853?[摘要] 目的
基因槍法介紹
基因槍法，又稱粒子轟擊(particle bombardment)，高速粒子噴射技術(High-velocity particle microprojection)或基因槍轟擊技術(gene gun bombardment)，是由美國Cornell大學生物化學系John.C.Sanford等于198
基因槍介導pVaxDsredIRESEGFP質粒轉染體外培養細胞系的
基因槍介導pVax-Dsred-IRES-EGFP質粒轉染體外培養細胞系的實驗研究 張 亮1 閻瑾琦1馬繼堯2 王 浩1 劉 寧1 賈銳1 韓 剛2 董金凱2 田仁禮2 于繼云[1] 1.軍事醫學科學院 基礎醫學研究所，北京 100850； 2.解放軍總醫院 泌尿外科，北京 1008
基因槍技術介紹
基因轉移技術是一種將外源基因以在體(in vivo)或離體(in vitro)的方式導入到靶細胞核內的技術, 屬于基因工程技術(亦稱重組DNA?技術)的一個重要組成部分。基因工程技術以分子生物學等學科發展為基礎, 使人類擁有了構造生物遺傳物質新組合的能力。對在體方式而言, 基因轉移技術需要跨越細胞外
基因槍法的作用
基因槍法，又叫粒子轟擊細胞法或微彈技術。基因槍的作用是用壓縮氣體(氦或氮等) 動力產生一種冷的氣體沖擊波進入轟擊室(因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷)，把粘有DNA?的細微金粉打向細胞，穿過細胞壁、細胞膜、細胞質等層層構造到達細胞核，完成基因轉移。只有很少部分的細胞符合這樣的要求，大多數會
基因槍的歷史
基因槍的歷史可以追溯到1987年。第一代基因槍是臺式基因槍，其中火藥型臺式基因槍是基因槍中最原始的類型。最早的基因槍是由美國康奈爾大學Sanford于1987年與該校工程技術專家Wolf及Kallen合作研究出的一種基因轉移的新方法。該方法一經發明便在學界嶄露頭角，Klein等人于1987年最早應用
基因槍的分類
這一方法是依靠一種基因槍來幫助導入外源基因。基因槍根據動力系統可分為火藥引爆、高壓放電和壓縮氣體驅動三類。其基本原理是通過動力系統將帶有基因的金屬顆粒（金粒或鎢粒），將DNA吸附在表面，以一定的速度射進植物細胞，由于小顆粒穿透力強，故不需除去細胞壁和細胞膜而進入基因組，從而實現穩定轉化的目的。它具有
什么是基因槍？
基因槍技術, 又被稱為生物彈道技術(Biolistic Technology) 或微粒轟擊技術(Particle Bombardment Technology),是 用火藥爆炸或者高壓氣體加速將包裹了DNA的球狀金粉或者鎢粉顆粒直接送入完整的組織或者細胞中的一種技術。它是基因轉移技術中的一種方法。其
基因槍操作步驟
微彈制備（金粉母液配制） （1）稱取60mg金粉加入Eppendorf管。 （2）加入1mL 75%乙醇，充分渦旋，靜置15min，1500rpm離心5min。 （3）棄上清，加入1mL無菌水，充分渦旋，1500rpm離心5min。重復3次。 （4）棄上清，加入1mL無菌
什么是基因槍法？
基因槍法，又叫粒子轟擊細胞法或微彈技術。基因槍的作用是用壓縮氣體(氦或氮等) 動力產生一種冷的氣體沖擊波進入轟擊室(因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷)，把粘有DNA?的細微金粉打向細胞，穿過細胞壁、細胞膜、細胞質等層層構造到達細胞核，完成基因轉移。只有很少部分的細胞符合這樣的要求，大多數會
手提基因槍和臺式基因槍應用范圍有哪些區別？
手提基因槍主要應用于活體或者戶外植物以及需要貼壁轟擊的受體。臺式主要適用于組織，或者外植體以及細胞器、葉綠體、線粒體。原理沒有區別主要是受體選擇上，原則上可以通用。
轉基因技術基因槍法簡介
利用火藥爆炸或高壓氣體加速（這一加速設備被稱為基因槍），將包裹了帶目的基因的DNA溶液的高速微彈直接送入完整的植物組織和細胞中，然后通過細胞和組織培養技術，再生出植株，選出其中轉基因陽性植株即為轉基因植株。與農桿菌轉化相比，基因槍法轉化的一個主要優點是不受受體植物范圍的限制。而且其載體質粒的構建
基因槍法轉化小麥實驗——使用－PDS1000/He－基因槍轟擊
實驗材料金粉試劑、試劑盒乙醇消毒液實驗步驟注意：由于基因槍通過高壓使粒子加速到極高的速度，故操作基因槍時應采取適當的安全措施并且佩戴安全眼鏡。在任何使用基因槍轉化的實驗中，必須設置對照檢測分化和選擇效率（見注 40) 。( 1 )? 根據 PDS-1000/He (見圖 4.2 ) 基因槍操作指南操
基因轉染技術的轉染方法介紹
1、轉染 轉染指通過生化或者物理方法將目的基因導入真核細胞中 。 2、感染 感染指通過病毒介導，用基因組中攜帶有克隆目的片斷的病毒來感染靶細胞。
基因槍技術技術簡介
基因轉移技術是一種將外源基因以在體(in vivo)或離體(in vitro)的方式導入到靶細胞核內的技術, 屬于基因工程技術(亦稱重組DNA?技術)的一個重要組成部分。基因工程技術以分子生物學等學科發展為基礎, 使人類擁有了構造生物遺傳物質新組合的能力。對在體方式而言, 基因轉移技術需要跨越細胞外
基因槍法轉化小麥實驗
實驗材料幼胚盾片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒乙醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?漂白消毒劑 ? ?
什么是基因槍技術？
基因槍技術, 又被稱為生物彈道技術(Biolistic Technology) 或微粒轟擊技術(Particle Bombardment Technology),是 用火藥爆炸或者高壓氣體加速將包裹了DNA的球狀金粉或者鎢粉顆粒直接送入完整的組織或者細胞中的一種技術。它是基因轉移技術中的一種方法。其
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒植物凝膠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 乙醇 ? ? ? ?
基因槍操作程序
基因槍技術又叫做微粒轟擊技術或者生物彈道技術，是通過高壓氣體加速或者huo藥爆炸直接往完整的組織或者細胞中送入包裹了DNA的球狀金粉或者鎢粉顆粒的一種技術。 基因槍的操作方法 準備材料 將一薄層培養基鋪在9cm培養皿上，在培養皿中心平鋪材料，直徑在3cm范圍內。 處理金粉
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗試劑、試劑盒植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材EP 管移液槍實驗步驟1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，調到合適
基因槍的操作指南
基因槍技術又叫做微粒轟擊技術或者生物彈道技術，是通過高壓氣體加速或者huo藥爆炸直接往完整的組織或者細胞中送入包裹了DNA的球狀金粉或者鎢粉顆粒的一種技術。 基因槍的操作方法 準備材料 將一薄層培養基鋪在9cm培養皿上，在培養皿中心平鋪材料，直徑在3cm范圍內。 處理金粉
基因槍技術的歷史
基因槍的歷史可以追溯到1987年。第一代基因槍是臺式基因槍，其中火藥型臺式基因槍是基因槍中最原始的類型。最早的基因槍是由美國康奈爾大學Sanford于1987年與該校工程技術專家Wolf及Kallen合作研究出的一種基因轉移的新方法。該方法一經發明便在學界嶄露頭角，Klein等人于1987年最早應用
基因轉染技術的病毒方法轉染介紹
病毒作為基因轉染是基因遞送良好的工具，病毒載體的優點有： （1）在轉化的細胞中傳播重組的DNA分子作為穩定的遺傳成分； （2）可能將有缺陷的或突變的基因置于病毒調節信號的控制下以進行研究； （3）能將克隆的基因作為病毒微染色體的一部分 ，并能進行分離； （4）轉移效率較高。其主要缺點是病
基因轉染技術的轉染與分析介紹
具體的基因轉染條件應參考所使用的試劑和方法進行優化。靶基因被導入細胞后，一般在轉染后48小時，靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的，48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。如若建立穩定的細胞系，則可對靶細胞進行篩選，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物，最常用的真核表達基因載體
基因轉染技術介紹
用的基因轉染技術是將外源基因導入靶細胞需要一定的載體和導入方法，基因轉技術則是將純化的含有靶基因的質粒DNA送入細胞內，并在細胞內表達。轉染方法有多種，根據不同的細胞，貼壁或懸浮細所可選用不同的方法，其目的是要達到設置轉染效率，影響轉染產率的因素有多種，包括轉染方法、操作技術、質粒DNA的純度
影響基因槍轉化的因素？
首先是氣源的壓力大小，以及射擊距離，實驗證明轟擊次數太多也會造成對細胞的傷害，因此一般以2-3次為宜。