1范圍
建立了高效液相色譜法測定保健食品中肉堿含量的方法。
本法適用于以肉堿為主要原料的保健食品中肉堿的測定。
2原理
用0.5mmol/l鹽酸溶液超聲提取樣品中的肉堿，用反相高效液相色譜法分離。標準樣品的保留時間是定性的，外部標準方法是定量的。
3試劑和材料
注：除非另有規定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1 磷酸氫二鉀（K2HPO4）。
3.1.2辛烷磺酸鈉(C8H19NaO3S)。
3.1.3 鹽酸（HCl）。
3.1.4磷酸（H3PO4）。
3.1.5硅藻土（SiO2）：化學純。
3.1.6乙腈(C2H3N)：色譜純度。
3.2 試劑配制
3.2.1鹽酸溶液（0.50 mmol/L）：吸收4.2 ml鹽酸，用水稀釋，體積為100 ml。然后取1mL上述溶液，用水稀釋，定容至1L·L~(-1)。
3.2.2緩沖液：分別稱取磷酸氫二鉀8.7g，辛烷磺酸鈉0.4325g，溶于水，稀釋至1L，用磷酸調節至pH 2.5。
3.3 標準品
肉堿（C7H15NO3）：純度≥98%或經國家認證認可的標準物質..
3.4 標準溶液配制
3.4.1肉堿標準儲備液（1.0 mg/ml）：肉堿標準品25 mg（精確至0.1 mg）精密稱取25 ml容量瓶中，溶于鹽酸溶液中，定容至刻度，搖勻。
3.4.2肉堿標準工作液：標準肉堿標準保留液在5 mL瓶中，用鹽酸稀釋至規模化，經0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL準確吸收，得到0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、0.60 mg/mL、0.80 mg/mL、1.0mg/mL的標準工作液。
4儀器
4.1高效液相色譜法：配備紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
4.2平衡：靈敏度為0.1mg和0.01mg
4.3 超聲波提取器。
5分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 試樣處理
5.1.1.1 固體試樣
樣品粉碎混合均勻稱取0.1g~2g（精確至0.001g）（含待測組分約5mg~50mg）。將鹽酸溶液加入50ml容量瓶中，超聲提取10min，冷卻，用鹽酸溶液稀釋至刻度，混勻，過濾，計數一次濾液毫升數，收集濾液，經0.45um水相膜過濾，取連續濾液進行檢測。
5.1.1.2 軟膠囊試樣
樣品被切開、擠壓和混合，重量為0.1g≤2g(精確到0.001g)，加入相同量的硅藻土，進行均勻分散研究，并說其中一部分(精確到0.001g，約5 mg~50 mg)，被測組分用塞狀三角瓶轉移到250 ml，吸收鹽酸溶液50 ml，加入三角瓶，稱重，填充超聲萃取10 min，冷卻，與鹽酸溶液混合，在毫升中丟棄初始濾液，收集濾液，經過0.45μm的水相濾膜，取濾液進行測量。
5.1.1.3 液體試樣
精密測量：1毫升～5毫升（含約5毫克～50毫克的待測組分），35毫升鹽酸溶液加入50毫升容量瓶，超聲提取10分鐘，冷卻，用鹽酸溶液稀釋，混合，過濾，丟棄一級濾液毫升，收集濾液，通過0.45微米水相濾膜，取連續濾液進行測定。
5.1.2 稀釋
根據樣品中肉堿的含量，將溶液中的肉堿稀釋至0.10mg/mL~1.0mg/mL。用鹽酸溶液。
5.2 色譜參考條件
5.2.1柱：C18柱：4.6*250 mm，5微米或同性能柱。
5.2.2流動相：緩沖溶液90 10。
5.2.3流量：0.8ml/min。
5.2.4 檢測波長：210nm。
5.2.5 進樣量：20μL。
5.3 標準曲線的制作
將肉堿標準工作液(3.4.2)分別從低濃度到高濃度注入高效液相色譜(HPLC)中，并測定相應的峰面積。以標準工作液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線
5.4待測溶液的測定
在相同的色譜條件下，將待測液（5.1.1.1，5.1.1.2，5.1.1.3，5.2.1）注入高效液相色譜法按保留時間定性測定峰面積，按標準曲線計算待測溶液中肉堿的濃度
6 分析結果的表述
試樣中肉堿含量按式（1）計算：
式中：
X—固體樣品中肉堿含量為g/100g，液體樣品中肉堿含量為g/100ml。
根據每毫升毫克標準曲線(毫克/毫升)計算待測溶液中肉堿的濃度。
V—試樣的稀釋體積，單位為毫升（ml）；
M/L-取樣質量，以克(G)為單位；抽樣量，以毫升(毫升)為單位；
F——稀釋倍數；
100——單位轉換；
1000——單位轉換。