飲料中苯甲酸鈉、糖精鈉含量的測定（高效液相色譜法）

　　一、目的

　　1、學習及了解高效液相色譜儀的工作原理及操作要點。

　　2、掌握高效液相色譜法測定糖精鈉、苯甲酸鈉的原理及方法。

　　3、學會使用高效液相色譜儀、學會以識別色譜圖。

　　二、原理

　　樣品加熱除去二氧化碳和乙醇，調節PH至近中性后，過濾，然后經高效液相色譜儀反相色譜分離，根據保留時間和峰面積進行定性定量。

　　三、試劑

　　1.甲醇：經濾膜(0.5μm)過濾。

　　2.氨水(1＋1)：氨水與水等體積混合。

　　3.0.02mol/L乙酸銨溶液：稱取1.54g乙酸銨，加水至1000ml溶解，經濾膜10.45μm過濾。

　　4.糖精鈉標準貯備液：準確稱取0.0851g經120℃烘干4h后的糖精鈉，加水溶解定容至100ml。此溶液糖精鈉含量為1.0mg/ml。

　　5.糖精鈉標準使用液：吸取糖精鈉標準貯備液10.0ml于100ml容量瓶中，加水至刻度。經濾膜(0.45μm)過濾。此溶液每毫升相當于0.10mg糖精鈉。

　　四、儀器和用具

　　高效液相色譜儀、紫外檢測器。

　　五、測定方法

　　1、樣品處理稱取5.0～10.0g樣品中，用氨水(1＋1)調至PH7，加水定容至適當體積，經濾膜(0.45μm)過濾，濾液用作HPLC分析。

　　2、高效液相色譜參考條件

　　1.色譜柱：YWG-C184.6mm×150mm，5μm，或其他型號C18柱。

　　2.流動相：甲醇＋乙酸銨溶液(0.02mol/L)(5＋95)。

　　3.流速：1.0ml/min。

　　4.進樣量：10μl。

　　5.檢測器：紫外檢測器，波長230nm，靈敏度0.2AUFS。

　　根據保留時間定性，外標峰面積法定量。

　　六、結果計算

　　X＝　(3-13)

　　式中：X――樣品中糖精鈉的含量，g/kg(L)；

　　m1――進樣體積中糖精鈉的質量，mg；

　　m2――樣品質量，g；

　　V1――樣點稀釋總體積，ml；

　　V2――進樣體積，ml。