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  • 發布時間:2019-05-20 19:06 原文鏈接: 靶向克隆法

    靶向克隆法是一種新的基因克隆方法,該克隆方法的特點是:在基因克隆過程中不使用已有的DNA Ligase,而是使用新開發的靶向克隆酶。靶向克隆酶能夠使末端序列相同的雙鏈DNA(14bp-18bp)同源重組,從而達到克隆基因的目的。



    LP Recco酶,中文名:靶向克隆酶,無需傳統基因克隆所需要的限制性內切酶和連接酶,使基因克隆位點選擇的限制性大大減少;能在一天之內完成從PCR開始到轉化的全部過程;陽性克隆不存在方向相反的問題,百分之百的正向連接;如果實驗順利,23天即可得到研究人員所需要的克隆。而傳統的克隆方法由于需要尋找與需要克隆的基因和載體相適應的限制性內切酶位點、連接酶連接以及挑選方向正確的陽性克隆,整個過程需要兩個星期到三個月不等,有時由于找不到合適的限制性內切酶位點,甚至根本無法克隆研究人員感興趣的基因。LP Recco酶將為基因克隆技術帶來一場革命性的變革。



     LP Recco酶特點



    l        準確、定向克隆PCR擴增的基因片斷



    l        無需限制性內切酶



    l        不用去磷酸化載體,無需連接酶



    l        適用任何類型的克隆載體、插入片斷和酶切位點



    l        只要線性化載體就行(單酶切、雙酶切均可),不用酶切PCR產物,不用補平末端



    l        可使用任何類型的Taq酶(常規Taq、各種高保真酶均可)的擴增產物



    l        操作簡單,將混合物25孵育30min即可轉化



    l        可克隆長達12Kb的基因片斷



    l        克隆效率高,轉化率高



    l        重復性高、可靠性好——可用于高通量操作,批量克隆


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