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  • 發布時間:2019-04-13 12:41 原文鏈接: 非特異性酯酶染色實驗

    實驗方法原理NAE將α-乙酸萘酚水解,產生α-萘酚,再與重氮鹽偶聯,生成不溶性的有色沉淀位于胞質中。
    試劑、試劑盒

    磷酸鹽緩沖液α-乙酸萘酚加重氮鹽甲基綠水港派

    實驗步驟

    一、 實驗試劑:

    1. 作用液:l/20mol/L  磷酸鹽緩沖液(PH7.4)40mg加10g/Lα-乙酸萘酚(以50%丙酮做溶劑)0.8ml,充分振蕩,直至最初產生的混濁物大部分消失為止,加重氮鹽,(堅牢藍B或其他種均可)40mg振蕩,過濾后使用.

    2. 1g/L甲基綠水港派

    二、 實驗操作:

    l. 固定新鮮涂片置10%甲醛生理鹽水固定5min

    2. 流水沖洗5min

    3. 加入37℃作用液中1小時

    4. 水洗

    5. lg/L甲基綠水溶液復染5min

    6. 水洗,干后鏡檢.

    NaF抑制試驗:方法同上,在 40ml作用液中加入氟化鈉(NaF)6mg(每毫升作用液加NaF-l.5mg),若陽性明顯減弱或呈陰性,示被NaF抑制最好能計算NaF抑制率,其公式為:

    (加NaF后NSE積分值/未加NaF時的NSE積分值)×100%凡抑制率>50%者,提示確受NaF所抑.四. 實驗判定結果:細胞質內有灰黑色或棕黑色彌漫性或顆粒狀沉淀為陽性,胞質內無沉淀者為陰性.

    展開 
    其他

    1. 標本必須新鮮,應于取材后兩天內染色,否則酶的活性顯著降低.若冰箱內保存,可適當延長保存時間.

    2. 重氮鹽的選擇,以堅固藍B.堅固藍RR及堅固黑B重氮鹽的染色為好.


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