隨著人民生活生平不斷提升，女性對自身健康的要求越來越高，陰道分泌物檢查也在快速發展，一些傳統檢查方法逐漸被新的儀器和試驗方法取代，筆者擬對陰道分泌物常規檢查的研究進展做簡要闡述。陰道分泌物是女性生殖系統分泌的一種帶有粘性的白色液體，它是由前庭大腺、子宮頸腺體、子宮內膜的分泌物和陰道粘膜的滲出液、脫落的陰道上皮細胞組成。陰道分泌物檢查用于女性生殖系統炎癥、細菌性陰道病、腫瘤、其它病原體的診斷及雌激素水平的判斷。陰道分泌物常規檢測(簡稱白帶常規)用于確定陰道清潔度，檢查陰道內有無滴蟲、念珠菌等病原體，同時還對女性泌尿生殖道疾病的診斷治療有重要意義[1]。
1 標本的采集
白帶常規漏診最重要的原因是標本采集的不合理。臨床醫師應根據對感染病原體的初步判斷來確定取材部位可顯著提高檢出率[2]。如霉菌好在陰道前，中、段的側壁生長，滴蟲容易在陰道后窟窿滋生，小陰唇兩側是細菌繁殖地，所以采集要注意部位，以免造成漏診[3]。采集標本的工具一般用鹽水浸濕的棉拭子，目前許多商家提供有特制采集刷，大大提高標本采集合格率。滴蟲和霉菌的檢出應注意季節的關系，高溫季節檢出率明顯高于其他季節，因為滴蟲一般在25~42℃環境溫度中能夠運動生長繁殖，因此標本采集后一定要采取簡便的保溫措施盡快送檢以提高檢出率[4]。為此，應建立規范的標本采集程序，檢驗科室應對不合格標本建議重新取樣。
2 陰道清潔度的研究
陰道分泌物作鹽水涂片，主要依靠白細胞、上皮細胞、陰道桿菌及雜菌的多少劃分清潔度。健康女性在出現月經周期前(即幼女)及絕經期后，陰道菌群發生改變，大量的乳酸桿菌消失，可見到少量的革蘭陽性球菌、桿菌(形似棒狀桿菌)和極少量的革蘭陰性桿菌。在健康無癥狀的女性陰道分泌物中，亦可偶然見到真菌。在具有大量乳酸桿菌的涂片中，仍可出現大量的炎癥細胞。所以孫靜等[5]對于陰道分泌物清潔度的劃分，綜合考慮受檢者的年齡、生理、陰道正常菌群、寄生蟲、炎癥細胞等因素。吳麗娟等[6]應用流式細胞學方法(flow
cytometey method，FCM)探索陰道分泌物快速定量分析，從陰道清潔度傳統方法(traditional
method，TM)和流式細胞學方法(flow cytometev
method，FCM)對比中探討陰道分泌物清潔度流式細胞學檢驗的可行性、分級標準和參考范圍，為陰道微生態學研究、臨床陰道疾病診斷和亞健康預警研究提供快速、定量分析。通過此方法建立的清潔度分析較現行傳統方法，具有快速、定量、更客觀、更準確的特點，重復性好，能更好地指導臨床并為陰道微生態的研究提供了分析手段。
3 線索細胞的研究
顯微鏡觀察尋找到線索細胞是診斷細菌性陰道病的重要指標。白帶常規鏡檢線索細胞、簡便、快捷、價廉，適用于門診檢查室和基層醫院。林峰等[7]認為在原來自帶常規檢查中加人線索細胞檢查可使一些常見婦科疾病的診斷率大大增加，漏減率大大減少。將線索細胞納入白帶常規檢查中，可為患者節省時間和費用，為臨床診治提供了準確、便捷的參考依據，使得白帶常規檢查提高一個層次[8]。臨床檢查線索細胞常用鹽水涂片直接鏡檢法，但革蘭染色成像法中檢查線索細胞的陽性率高于濕片法[9]。前者簡單、快速但較易誤認與漏檢，后者準確但較費時。俞葉夫等[10]利用菌釋試驗查找線索細胞。采用NaOH處理陰道分泌物，通過觀察細菌從上皮細胞中釋放的現象來檢查線索細胞，并同時做革蘭染色進行對照。此法NaOH消化了白細胞及各種雜質，視野清晰，細菌從線索細胞上釋放下來的現象能得以較清楚地觀察；退化、變性的上皮細胞由于其顆粒是細胞本身的一部分，加入NaOH后不會從上皮細胞上釋放下來，易于與線索細胞區別。菌釋試驗的陽性結果具有動態效果，與鹽水涂片直接鏡檢相比能提高線索細胞的檢出率，減少誤認與漏檢。此法不需特殊試劑，操作簡單，在檢查完線索細胞后可用于檢查霉菌、纖毛菌等，尤其是在大批量婦科體檢時能明顯提高工作效率。因此菌釋試驗適合臨床常規檢查線索細胞所用。其不足之處在于不能觀察菌群分布，加革蘭染色則能將陰道菌群分為正常態、過渡態和BV。鄧光責等[11]用吖啶橙染色法經熒光顯微鏡鏡檢查線索細胞，在染成綠色的上皮細胞和染成橙色的菌體之間對比清晰，使細小的桿菌極易識別。經革蘭染色法證實，吖啶橙染色檢查線索細胞結果可靠、具有一致性。是一種值得推廣應用的快速檢查法。汪文明采用革蘭染色借助Panasonic-wvGP230多媒體成像檢測儀成像后線索細胞的形態特征明顯優于濕片法，且陰道桿菌與革蘭陰性菌或其它陽性菌也易觀察，因而有利于臨床對陰道菌群失調的診斷，及時發現女性泌尿生殖道中的病原體，診斷和治療女性泌尿生殖道感染，有效控制女性生殖系統炎癥進一步發展都有著重要意義[9]。
4 鹽水稀釋法的改進
陰道分泌物檢驗常用生理鹽水稀釋涂片，可見到運動之滴蟲，但氣溫較低時，尤其在冬季，或標本放置時間過長，原蟲活動性降低，不易檢出，臨床上我們習慣將標本稍加溫后鏡檢效果也不明顯。陸仁楓[12]改進為鹽水稀酸稀堿三步法，加酸后蟲體脹大呈圓形或長圓形，蟲體內為粗細均勻的顆粒，有的仍可見到鞭毛。以此為特征，有效地提高了滴蟲的檢出率。加酸同時將紅細胞破壞，使白細胞清晰易見，提高了觀察清晰度的速度。三步法加堿后迅速溶解涂片中的白細胞，上皮細胞等有形成份，低倍鏡檢，發現菌絲樣物，或高倍鏡檢見單個或成群卵圓形、無色透明的孢子，從而準確報告霉菌，三步法較單純鹽水稀釋法步驟增多，但并不繁瑣，使診斷準確率明顯提高，且試劑價格便宜，值得應用。羅曉云等[13]在此基礎上研究發現，生理鹽水稀堿二步法的應用使霉菌的檢出率大為提高，有效地防止對霉菌漏診與誤診。此方法與生理鹽水稀酸稀堿三步法、培養法相比更簡便、快速、成本低、特異性高，適用于臨床常規檢驗及大批體檢。
目前大多數學者建議淘汰生理鹽水稀釋法而代之以涂片染色法進行陰道分泌物常規檢驗[2]。滴蟲需在25~42℃的液體中方能活動，冬春兩季由于室溫較低滴蟲活動受影響，鹽水中鑒別較困難，檢出率低，而快速染色法查滴蟲不受溫度和離體時間長短的影響，可彌補鹽水涂片查滴蟲在溫度低、離體時間長時檢出率下降的缺點，并且檢查念珠菌不受標本清潔度的影響。快速染色法可在一張涂片中同時作滴蟲念珠菌、纖毛菌、加特納菌、腎形相對雙球菌等多項檢查，方法簡便易掌握，檢查快速，檢出率高，值得臨床推廣應用[14]。
5 染色方法的研究改進
目前的染色方法很多，白帶常規檢查加做革蘭染色后的標本，因滴蟲個體較大且有特定結構易于辨認，蟲體內可見粗細均勻的顆粒，甚至能清晰觀察到鞭毛，提高了陽性檢出率。染色后的霉菌呈革蘭陽性，芽生孢子及假菌絲的形態均典型突出，特別是標本中霉菌量少又有膿細胞，上皮細胞、粘液絲等有形成份的掩蓋，革蘭染色后不易與其它污染物相混淆，因而提高了霉菌診斷率。染色后的標本對于清潔度更容易判斷，還可進一步了解陰道內正常菌群與病原菌的數量及分布狀況．特別有助于對淋病奈瑟氏菌的檢查，給臨床提供更準確檢查結果。此方法操作簡便、易于掌握，特別是中、小醫院檢驗科更加適用，值得推廣[15]。葛亞娟等[16]采用衛生部推廣的婦科白帶涂片多項檢查快速染色技術(CTB)，與生理鹽水涂片法和革蘭染色對比，具有檢測項目多，方法簡便，病原體形態清晰，檢出率高，不需特殊設備，可重復讀片，快速等優點，是白帶中病原體檢測的一種較好的方法。張蘇堅等[17]也報道白帶涂片采用CTB快速染色法同時作滴蟲、霉菌、纖毛菌、淋球菌等多項檢查，3
min內就可以在鏡下觀察結果，時間短、病原體檢出率高、費用低，是一種較好的白帶常規涂片檢查方法，值得推廣應用。所以陳廣福[2]認為白帶常規染色方法推薦“白帶10項快速染色法”，假絲酵母菌、陰道毛滴蟲、線索細胞都有其特征的染色背景而方便準確查找，形態不典型時還可借助其它方法來確證。
6 顯微鏡的應用
白帶常規中顯微鏡發揮著重要作用。對異常白帶檢查結果．通過外觀及鏡檢即能作出較正確的常規檢查報告。但普通顯微鏡觀察結果帶有主觀性，不同檢驗人員存在結果差異。賈思公等[18]利用南京康氏保健制品有限公司產9702型超高倍顯微診斷儀(MDI)直接檢測陰道分泌物衣原體。利用MDI，在PH2相差視野下，可見衣原體包含體呈球形或近球形，體積比紅細胞略小，大小略不一，有明顯的膜，內含數量及大小不等的活動顆粒，很容易識別是衣原體。有時一張白帶標本片，觀察幾十個視野，只能找到很少幾個衣原體包含體，說明為感染初期。此法于其它方法受抗原濃度低的制約，用MDI檢測，則可早發現，早治療，并且MDI檢測白帶，成本低廉，取材方便，患者無痛苦，操作簡單，只需10
min左右即可出結果。一張白帶標本片，可觀察幾十個視野，標本成分如上皮細胞、白細胞、紅細胞、陰道桿菌、衣原體、霉菌、滴蟲等，盡收眼底，可同時檢出，避免了誤檢與漏檢。還配有病原微生物的照片，為臨床醫師綜合判斷病情提供了可靠的診治依據。陸建紅等[19]利用相差顯微鏡觀察陰道分泌物查找線索細胞，方法簡單，不需染色，分辨率高。相差顯微鏡以其特有的優勢，能使細胞中不同折光的部分變成明暗相差顯著的立體圖像，因而無需染色，就可以清晰地觀察到上皮細胞表面各種細小的變化。我科所用的ACT-2000超高倍生物顯微鏡，具有普通亮場和相差視野之間可以自由切換的功能，能在門診陰道分泌物常規檢查時，直接切換到相差視野下查找線索細胞，因此病理陽性檢出率高，且操作簡單，不需染色，不用油鏡，報告快速，值得推廣。
7 質量控制
為了提高陰道疾病實驗室診斷的整體水平，安邦權等[20]通過現場陰道分泌物瑞特染色和/或革蘭染色后進行質量考核(室內質量控制)，將染色良好的涂片送各家醫院臨檢室進行交流(室間質評)，建立了以瑞特染色或革蘭染色處理白帶標本的質量控制體系。此法可以進行快速多項目檢查，設備和技術條件要求不高，成本低，易普及；尤其冬春季節查滴蟲不受保溫措施的限制，可同時檢查核異質細胞、腫瘤細胞及線索細胞，判定清潔度，陽性檢出率較高，有利于陰道疾病的診斷和治療。滴蟲、霉菌及細菌性陰道炎是婦科常見病、多發病，為了提高其陽性診斷率，確定致病體，很有必要研究更簡便可靠的l臨檢方法，建立起可靠的質控制度。目前建立了PCR檢測淋菌、使用單抗檢查滴蟲，建立了熒光染色及培養法等方法，但這些方法儀器昂貴，實驗條件要求較高，操作繁瑣費時等限制了推廣應用，我們應尋找更可靠的、經濟適用的質控手段，不斷提高陰道分泌物檢查的質量，相信新儀器，新技術的不斷出現會讓其變得容易實現。