酵母菌RNA制備實驗—玻璃珠法

酵母菌

酚氯仿異戊醇

玻璃珠試管搖床培養箱離心機

1.  培養并收集酵母菌細胞，冷凍細胞沉淀。

2.  用300 μl RNA緩沖液中重懸細胞沉淀。

3.  加1體積冷的酸洗玻璃珠（體積與約200 μl 水相等）、300 μl 的用RNA緩沖液平衡的25：24 ：1酚/氯仿/異戊醇，擰緊瓶蓋，然后顛倒并上下振蕩以保證珠子懸浮，在旋渦混合器上高速劇烈振蕩2 min。

4.  室溫下離心1 min，將200~250 μl 水（上）相轉移到一個干凈的離心管中。

5.  加等體積的25：24：1酚/氯仿/異戊醇，激烈振蕩10 s。

6.  重復步驟4，加3體積冰冷的無水乙醇，充分混合，于-20℃放置30 min 以上，或在干冰上放置5 min。

7.  于4℃離心2 min，吸出或倒掉上清，用冰冷的70%乙醇洗滌沉淀。

8.  于4℃離心1 min，吸出或倒掉上清，干燥沉淀。沉淀用50 μl 水重懸，用分光光度法測定A₂₆₀及A₂₈₀以確定濃度，于-70℃貯存RNA。