1. 在18 mm×150 mm 無菌玻璃培養管或17 mm×100 mm 無菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培養基過夜培養酵母菌至靜止期。 2. 培養物室溫下在臺式離心機上1 200 g 離心5 min,吸出或倒掉上清,細胞用0.5 ml水重懸。
3. 將重懸細胞轉移至離心管中,室溫下離心5 s,倒掉上清,在旋渦混合器上快速振蕩分散菌體沉淀。
4. 細胞用200 μl 破菌緩沖液重懸,加0.3 g 玻璃珠(約200 μl 體積)及200 μl 酚/氯仿/異戊醇,高速振蕩3 min。 5. 加200 μl TE緩沖液,快速振蕩,高速離心5 min,室溫下將水相轉移到一個干凈的離心管中,加1 ml 無水乙醇,顛倒混勻。 6. 室溫下高速離心3 min,去上清,沉淀用0.4 ml TE緩沖液重懸。 7. 加30 μl 的1 mg/ml RNA酶A,混合,37℃溫育5 min。 8. 加10 μl 4 mol/l 乙酸銨及1 ml 無水乙醇,顛倒混勻,室溫下高速離心3 min,棄上清,干燥沉淀,DNA用100 μl TE緩沖液重懸。 展開 |