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  • 發布時間:2019-04-08 22:11 原文鏈接: 酵母菌DNA制備實驗2

    實驗材料

    酵母

    試劑、試劑盒

    TERNA酶乙酸銨無水乙醇

    儀器、耗材

    離心機培養箱玻璃培養管

    實驗步驟

    1.  在18 mm×150 mm 無菌玻璃培養管或17 mm×100 mm 無菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培養基過夜培養酵母菌至靜止期。


    2.  培養物室溫下在臺式離心機上1 200 g 離心5 min,吸出或倒掉上清,細胞用0.5 ml水重懸。


    3.  將重懸細胞轉移至離心管中,室溫下離心5 s,倒掉上清,在旋渦混合器上快速振蕩分散菌體沉淀。

     

    4.  細胞用200 μl 破菌緩沖液重懸,加0.3 g 玻璃珠(約200 μl 體積)及200 μl 酚/氯仿/異戊醇,高速振蕩3 min。

     

    5.  加200 μl TE緩沖液,快速振蕩,高速離心5 min,室溫下將水相轉移到一個干凈的離心管中,加1 ml 無水乙醇,顛倒混勻。

     

    6.  室溫下高速離心3 min,去上清,沉淀用0.4 ml TE緩沖液重懸。

     

    7.  加30 μl 的1 mg/ml RNA酶A,混合,37℃溫育5 min。

     

    8.  加10 μl 4 mol/l 乙酸銨及1 ml 無水乙醇,顛倒混勻,室溫下高速離心3 min,棄上清,干燥沉淀,DNA用100 μl TE緩沖液重懸。

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