(1)以1%戊巴比妥鈉溶液(50mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。
(2)將大鼠固定于手術臺上,沿中線切開頭皮掛線曠置。
(3)手術顯微鏡下沿眶內緣小心分離左眶軟組織,盡量向兩眥延伸。
(4)依照解剖層次分別牽開眼外肌肉,充分暴露眼球后極和視神經眶內段。
(5)縱向切開視神經背側鞘膜,注意避免傷及視網膜中央動脈。
(6)在眼球后極1.5mm處以顯微剪剪斷視神經。
(7)剪取小片封口膜并展薄,戳一小孔,容視神經殘段通過,將一小塊明膠海綿浸吸5%熒光金溶液,包埋視神經殘段以逆行標記節細胞。將封口膜折疊包裹視神經殘段及明膠海綿填塞于眶后。
(8)術畢縫合眼眶,以及頭皮,并抗感染處理,調整頭皮張力,可容雙瞼閉合。術中及術后檢查手術側眼底血供情況。
(9)術后相應時間點處死動物取眼球進行視網膜鋪片。
結果: 1.在手術過程中以及術后注意觀察眼底是否出血或者缺血,造成這兩者原因主要為眼損傷或剪斷視網膜中央動脈,出現這兩種情況的動物均不能用于后續試驗。
2.在視網膜鋪片后進行顯微鏡下觀察,熒光金標記清楚,無未標上的區域,表明熒光金逆行標記試驗成功(圖4-12)。 
3.熒光金標記的節細胞胞體多呈卵圓形,邊界清晰,大小不一;其分布由中央向周邊部逐漸稀少;在損傷2d后逐漸開始出現標記的小膠質細胞,為吞噬了死亡的節細胞而成金黃色,其形態為胞體細長,形態不規則,較易與節細胞區分開來。 展開 |