血清中肌酐的檢測方法及其進展

　　血清肌酐的檢測對臨床診斷、治療具有十分重要的意義。目前，檢測血清內肌酐的方法包括同位素稀釋質譜法、拉曼散射法、毛細管電泳法、酶法以及Jaffe反應法等。但是，目前關于血清內肌酐的檢測方法尚未有統一的定論，本文旨在進一步了解血清內肌酐的檢測方法及進步發展，為臨床提供有效的參考依據。

　　肌酐，學名甲基胍基乙酸內酰胺，其相對分子量很小，屬于極性有機含氮化合物的一種[1]。機體肌肉中肌酐由磷酸肌酸不可逆轉化或自發性的形成。

　　在正常條件下，人體中肌酐水平相對穩定，通常其水平范圍為3.0-14.0 mg/L。當腎臟機能受到損傷時，肌酐的正常排泄功能受到一定阻礙，血清內肌酐水平升高。所以，血清內肌酐水平是體現腎臟功能的一項重要指標。現針對血清內肌酐的檢測方法進行深入了解，綜述如下。

　　1.檢測方法

　　1.1 Jaffe 檢測法

　　Jaffe就是堿性苦味酸肌酐反應，早在1886年便有研究發現苦味酸、肌酐在堿性環境中發生反應時，可產生一種紅色物質。Green-wold通過試驗Jaffe反應觀察發現[2]，這種紅色產物是肌酐與苦味酸之間反應產生的1:1、1:2的絡合物。

　　有的肌酐衍生物或同系物，例如乙內酰脲、膽紅素、丙酮酸等物質可與苦味酸相互反應，統稱為假肌酐，可導致血清肌酐的檢測結果偏高，由于血清紅細胞中含有大量的假肌酐，所以肌酐檢測不宜選用全血。

　　隨著自動化設備的普及應用，人們對Jaffe 反應試驗進行了許多改進[3]，以利于提高檢測結果的準確性，同時實現自動化分析，但是仍然沒有從根本上解決非特異性反應的問題，血清內血紅蛋白、抗壞血酸等物質對反應有所影響，導致結果偏低或偏高。

　　Junge等人又對Jaffe進行了進一步改良[4]，通過氣相色譜一同位素稀釋質譜法對大量混合血清標本進行了檢測，結果發現為了達到與酶法的相似結果，一定要用21.0 ?mol/L對該法給予補償校正。

　　1.1.2酶法

　　酶法檢測血清內肌酐是通過肌酐在過氧化物酶、肌氨酸氧化酶、肌酸脒基水解酶、肌酐氨基水解酶等酶、顯色劑與氧、水共同作用下產生紅色的醌亞胺[5]，用505 nm波長檢測其吸光度A，吸光度A值的大小與標本內肌酐水平呈正比的原則進行設計。

　　試驗的主要干擾物為標本內含有的肌酸，可通過雙試劑將肌酸去除掉。酶法避免了Jaffe 法特異性較差的特點，具有非常強德爾抗干擾能力，不會產生試劑毒性，更適合用于自動分析儀檢測。但是，上述方法中大部分內源或外源物質對血清內肌酐的檢測造成一定干擾，或是實驗試劑穩定性差。

　　1.1.3毛細管電泳法

　　毛細管電泳是近幾年才引進試驗的一種儀器分析方法，具有自動化程度較高、樣品用量較少、分析速度較快、分離效率較高等特點[6]。毛細管電泳法檢測中，血清只需要進行過濾，便可直接置入含有二氧化硅的毛細管柱內。

　　通過磷酸緩沖溶液（溶液PH值為2.3），濃度為75.0 mmol/L，環境溫度為15攝氏度。與其他毛細管電泳法相對比，這種方法更加快捷、經濟，回收率可達99.0%，批內相對標準偏差約為3.59%，批間相對標準偏差約為5.91%。但是，毛細管內壁有時會殘留微量的蛋白質，致使檢測結果的重復性比較差。

　　1.1.4拉曼散射法

　　拉曼散射法與同位素稀釋質譜法相似[7]，將銀膠體粒子作為表面增強拉曼散射法的一種基質。

　　試驗前應用0.02 mol/L的氯化鈉溶液將銀膠體粒子誘導產生一些聚集。將20 u肌酐溶于標液放在一個標準石英池內，并且認真振搖，確保樣品徹底混合均勻。

　　檢測結果的標準偏差低于2.0%。這種方法的優點在于不需要費用較高的質譜，還能夠用于檢測含硫、氮等特殊官能團的物質。

　　1.1.5同位素稀釋質譜法

　　（1）GC-ID/MS 法：早在1986年，美國便將GC-ID/MS檢測血清肌酐水平的方法作為國家標準[8]。在GC-ID/MS檢測分析中，需要對樣品進行預處理，把肌酐內的肌酸去除，例如衍生化、離子交換等。所以，樣品的前處理相對復雜、所用時間較長、成本較高。人們經大量試驗進一步發展了LC-ID/MS，該方法樣品的預處理相對簡單，通常只需要沉淀或過濾蛋白質，便可直接應用液相柱，有效分離肌酐與肌酸。

　　（2）LC-ID/MS法：近些年，美國LGC首次通過LC-ID/MS檢測參與了IMEP-17/CCQM-K12的國際比對[9]，結果收效甚好，不確定度在0.5%以下。LC-ID/MS檢測法與GC-ID/MS法相對比，樣品的預處理比較簡單，只需進行離心、沉淀蛋白質即可，過濾后便能夠直接進樣予以樣品分析，同時該法的偏差可與GC-ID/MS相提并論。

　　2.總結

　　根據GC-IS/MS、LC-ID/MS檢測方法的發展可知，美國、歐盟等國家對于機體血清內肌酐水平的參考方法與決定方法開展了大量的深入研究[10]，同時獲得了較大進展。其中，肌酐的定值方法已經確定氣質、液質兩種同位素稀釋質譜法。

　　國內臨床檢驗量值應該還處于基礎研究，與美國、歐盟等國家的研究水平還相距甚遠。我國衛生部臨檢中心、國家標準物質研究中心也逐漸開展了相關的試驗研究。現階段，在全球改進醫學檢測準確度、建立全球統一的體外診斷參考體系的情況下，制定我國的參考系統勢在必行。

　　在常規檢測方法中肌酐亞胺水解酶法，與肌氨酸氧化酶法具有較寬的線性，且不受常用藥物、溶血、乳糜、膽紅素、維生素C的影響，具有操作方便、特異性高、省時省力等優點，可作為目前血清肌酐檢測的首選方法。

　　參考文獻

　　[1]戴新華.血清中肌酐的液相色譜-同位素稀釋質譜法測定[J].分析測試學報,2011,27(1):84-86.

　　[2]全燦.液相色譜-同位素稀釋質譜法準確測定血清中的肌酸酐含量[J].質譜學報,2011,27(3):135-139.

　　[3]程武,連國軍.血清肌酐測定方法學進展及其評價[J].中國保健,2011,22(15):247-248.

　　[4]戴新華,徐銳鋒,張春梅.血清中尿酸的測定方法及其研究進展[J].2011,12(4):446-447.

　　[5]周碧燕,李友邕,覃政,等.血清肌酐常規測定方法和臨床應用的研究進展[J].化學試劑,2011,12(8):167-168.

　　[6]張超.血清肌酐肌氨酸氧化酶法與苦味酸動力學法檢測結果的比較[J].中華檢驗醫學雜志,2011,12(6):204-205.

　　[7]居漪,曾芝如.酶法和Jaffe速率法測定血清肌酐的方法學比較[J].上海醫學檢驗雜志,2011,22(12):548-549.

　　[8]張宏斌,鄧敬儀.肌氨酸氧化酶法檢測血清中肌酐含量的方法學評價[J].實用醫技雜志,2011,11(22):3927-3928.

　　[9]謝繼光,蒙凱.血清肌酐測定方法的研究[J].臨床和實驗醫學雜志,2011,12(20):461-462.

　　[10]鄒燕,陳梅,馮彩蓮.兩種血清肌酐測定方法的評價[J].宜春學院學報,2011,22(4):121-122.

　　作者：吳漢項