薄層層析分離中的薄層板制作是指將經離心機處理后的固定相支持劑均勻地涂布在玻璃板上形成薄層。玻璃板要求表面平滑、清潔，大小按需要選定。
一、干板制作：
干板是將不加粘合劑的支持劑干粉均勻地涂布在玻璃板上制成的薄層板。干板制作簡單，展開快，但極易吹散。制作方法如下：
1、選直徑約為50mm的玻璃管一根，根據薄層的厚度（一般為0.4～1mm）在其兩端繞膠布數圈。
2、將支持劑干粉倒在玻板一端，固定玻璃板一端以防玻璃管推進時移動。
3、把玻璃管壓在玻璃板上，將支持劑干粉由玻璃板一端推向另一端，即形成薄層。
二、濕板制作：
濕板是將支持劑加粘合劑和水或其它液體后均勻地涂布在玻璃板上，經烘干而成的薄層板。下面介紹三種制板方法：
1、玻璃棒涂布：
將支持劑用水或適當溶劑調成膠漿，倒在玻璃板一端，然后按干板的制作方法，用玻璃棒將支持劑由玻璃板一端推向另一端，即形成薄層。
2、玻璃片涂布：
將支持劑用水或適當溶劑調成膠漿，倒在玻璃板一端，然后按干板的制作方法，用玻璃片將支持劑由玻璃板一端推向另一端，即形成薄層。
3、傾斜涂布：
將支持劑膠漿倒在玻璃片上，然后將玻璃板傾斜，使膠漿均勻涂布在玻璃板上。
用上述任何一種方法將支持劑均勻涂布在玻璃板上后靜置片刻，待薄層表面無水漬后置烘箱中，溫度升至100℃后持續1小時，關閉電源，待溫度降至接近室溫時，取出薄層板放入干燥器，此步驟稱為活化。